Помощь по Теле2, тарифы, вопросы

Сифилис – одно из самых опасных венерических заболеваний, возбудителем которого является бледная трепонема. Вредоносные микроорганизмы могут проникнуть в организм после незащищенного полового акта и бытовым путем. Сегодня анализ крови на сифилис является базовым, его проводят при медицинском профосмотре, а также требуют при устройстве на работу в некоторые организации.

Кроме того, процедура в обязательном порядке назначается беременным женщинам. Самым эффективным методом диагностики этого заболевания является лабораторное исследование венозной крови. Как называется анализ на сифилис, как к нему подготовиться и насколько достоверно такое исследование?

Показания к проведению

Условно все анализы на сифилис называются ОРС. Аббревиатура расшифровывается как отборная реакция на сифилис. Под этим термином подразумевается диагностическое лабораторное исследование, в ходе которого можно обнаружить антитела к фосфолипидам, формирующиеся из-за поражения клеток и тканей, вызванного бледной трепонемой.

Проверка на сифилис чаще всего проводится людям с подозрением на наличие заболевания, а также пациентам, которым назначено полноценное медицинское обследование. При этом стоит учитывать, что исследование предполагает проведение дополнительного анализа на ВИЧ и гепатит.

И также тестирование на сифилис назначается в следующих случаях:

• постановка женщины на учет при беременности;
• если пациент выступает как донор;
• при пребывании в местах лишения свободы;
• если предыдущие анализы показали присутствие в крови пациента наркотических веществ;
• длительное увеличение размера региональных лимфатических узлов;
• продолжительная лихорадка неясной этиологии;
• предыдущее тестирование показало присутствие бледной трепонемы;
• если у человека был половой контакт с зараженным сифилисом;
• возникновение сомнительной симптоматики, указывающей на развитие заболевания (первый признак сифилиса – появление высыпаний в области половых органов).

И также сдать биоматериал на исследование необходимо, если человек хочет устроиться на работу в некоторые учреждения:

• воинская часть;
• больницы, поликлиники, лаборатории;
• кафе, рестораны, столовые и другие места общественного питания;
• школы, детские садики.

Регулярное тестирование нужно проводить пациентам, у которых уже диагностировано данное заболевание. В этом случае анализ назначается для оценки эффективности выбранной схемы лечения.

Методы диагностики

Для выявления сифилиса или подтверждения его отсутствия используются разные методы диагностики и типы анализов. Наиболее информативным и точным методом исследования является изучение венозной крови пациента. Забор биоматериала может осуществляться как из вены, так и из пальца (в зависимости от типа лаборатории и методики).

В некоторых случаях обнаружение бледной трепонемы может осуществляться при помощи других образцов:

• ликвор (секрет, продуцирующийся в спинномозговом канале);
• содержимое лимфоузлов;
• ткани изъязвлений.

Диагностика сифилиса происходит одновременно несколькими методами

Каждое из существующих тестирований отличается информативность, имеет определенные преимущества и недостатки. Решать, каким именно способом сдавать анализ на сифилис, должен только лечащий врач, учитывая индивидуальные особенности пациента.

Клинический анализ крови (РВ/RW)

Самый распространенный способ диагностирования сифилиса – проведение . Данная иммунологическая процедура называется реакцией Вассермана. Тестирование относится к классу РСК (реакция связывания комплемента) и впервые было проведено в 1906 году.

Оно базируется на способности венозной крови сворачиваться и образовывать комплекс при взаимодействии с антигенами. Современные методы РСК в выявлении сифилитической инфекции существенно отличаются от классической RW. По сути, эти процедуры имеют только одинаковое название.

Постановка диагноза осуществляется с учетом того, присутствуют ли в исследуемом образце антитела, свидетельствующие о наличии заболевания. Несмотря на то что тестирование является максимально информативным и достоверным, нельзя исключать вероятности проявления ложноположительной реакции.

Ложноположительный ответ связан с тем, что в человеческом организме изначально присутствует кардиолипин, однако обычно иммунная система не создает антитела против родного антигена. Но медицинская практика показывает, что исключения случаются. Чаще всего это происходит, если человек недавно перенес вирусное заболевание тяжелой формы или столкнулся со следующими заболеваниями:

• воспаление легких;
• дисфункция почек;
• гематологические заболевания.

И также ложноположительная реакция нередко проявляется во время беременности, что сопровождается сильным ослаблением иммунной системы. Если специалист подозревает, что тестирование показало ложноположительный результат, пациенту назначаются дополнительные расширенные анализы.

Реакция микропреципитации (РМП)

Сегодня этот метод обнаружения сифилиса в крови постепенно вытесняет все остальные способы диагностики заболевания. Реакция микропреципитации – исследование, которое по механизму проведения схоже с реакцией Вассермана. Но в то же время процедура отличается простотой и большей информативностью – если образец заражен, в нем обязательно появятся белые хлопья.

Еще одно преимущество РМП – кровь на анализ берется не из вены, а из пальца. Если с момента заражения прошло более 30 дней, методика гарантированно покажет положительный результат. Риск получения ложноположительных сведений при таком тестировании сведен к минимуму и может проявиться только на фоне таких нарушений:

• обострившиеся инфекции;
• недавно перенесенный инфаркт;
• кровоизлияние в мозг;
• сильная интоксикация организма.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Еще один распространенный метод диагностирования сифилиса, осуществляемый при помощи венозной крови. Чтобы РИБТ дала правильный результат, за несколько дней до сдачи биоматериала необходимо исключить прием антибактериальных препаратов.

Это связано с тем, что большая часть антибиотиков при попадании в организм блокируют и подавляют деятельность бледных трепонем. Положительный ответ РИЮТ проявляется примерно с середины второй стадии заражения и может сохраняться даже после окончания лечения.

Так под микроскопом выглядит возбудитель сифилиса – бледная трепонема

РИФ и РИТ исследование

Многие пациенты сталкиваются с такой проблемой, что даже после окончания лечения сифилиса анализ показывает положительный результат. Выявить и оценить достоверную клиническую картину можно при помощи сверхчувствительных тестов РИФ (реакция иммунофлюоресценции) и РИТ (реакция иммобилизации трепонем).

Эти анализы отличаются сложностью и продолжительностью, их возможно провести только при наличии дорогостоящего современного оборудования.

РИФ анализ при сифилисе показывает положительную реакцию спустя 2 месяца после инфицирования. Если же тестирование показало отрицательный результат, значит, пациент здоров. Чаще всего РИФ и РИТ анализы делаются при положительной реакции микропреципитации для подтверждения достоверности результата.

ИФА и РПГА

К наиболее информативным и самым точным методам диагностики сифилиса относят тесты ИФА (иммуноферментный анализ) и РПГА (реакция пассивной гемагглютинации). Основное преимущество этих исследований – они готовятся в течение короткого периода времени.

РПГА дает положительный ответ уже через месяц после инфицирования и чаще всего проводится одновременно с нетрепонемными и трепонемными тестами. Обычно при помощи РПГА диагностируется первичная форма заболевания, сопровождающаяся возникновением язв и сыпи. Поскольку РПГА длительное время показывает положительную реакцию, методику редко применяют для оценки эффективности назначенной схемы лечения.

Иммуноферментный анализ может показать присутствие вредоносных микроорганизмов уже через 3 недели после инфицирования. Ложноположительный результат проявляется редко и чаще всего связан с системными патологиями или дисфункцией обменных процессов.

Подготовка к проведению процедуры

Провести тестирование на сифилис можно в любой лаборатории Москвы и других крупных городах. Чаще всего назначение на исследование выписывается врачом-венерологом. При желании тестирование можно провести и анонимно, без направления.

Чтобы результаты анализа были достоверными, перед процедурой необходимо придерживаться правил подготовки:

• поскольку забор биоматериала осуществляется натощак, перед процедурой запрещено есть. Единственное, что допускается – пить воду;
• за 3 суток до анализа рекомендуется отказаться от потребления жирной пищи и алкогольной продукции;
• если пациент принимал антибиотики, анализ можно проводить только спустя неделю после окончания лечения.

Откуда берут кровь на сифилис, зависит от типа назначенной процедуры, но в большинстве случаев забор биоматериала осуществляется из вены. Время расшифровки результата зависит от типа лаборатории, обычно лаборанты предоставляют результаты уже через 1–2 дня. И также в некоторых клиниках предоставляется услуга экстренной проверки, когда результаты выдаются на руки уже через несколько часов после сдачи крови.

Стоит учитывать, что анализ на сифилис действителен на протяжении 3 месяцев, по истечении этого времени тестирование нужно проводить повторно

Расшифровка результатов

Большинство клинических лабораторий выдает бланк с результатами на руки пациенту. Полученный бланк необходимо отнести врачу, назначившему исследование, который, отталкиваясь от полученных сведений, оценит общую клиническую картину. Может ли пациент самостоятельно прочесть результаты тестирования?

Изучая описанные сведения, можно сделать только предположительный вывод, но окончательный диагноз ставится исключительно квалифицированным специалистом. При профилактическом осмотре или экспресс-диагностике чаще всего назначаются нетрепонемные тесты. Результат тестирования обозначается таким образом:

• «-» – отрицательный результат;
• «+», «++», «1+» «2+» – слабоположительный результат;
• «+++», «++++», «3+», «4+» – положительный анализ на сифилис.

При этом стоит учитывать, что полученный результат может быть как ложноположительным, так и ложноотрицательным. Если следы сифилиса у пациента отсутствуют, и у человека не было незащищенных половых актов с новыми партнерами, врач может истолковать ложный результат как верный.

Заключение

Сифилис – опаснейшее заболевание, которое медленно и бессимптомно развивается и ведет к тяжелым осложнениям вплоть до гибели пациента. Именно поэтому проводить тестирование на присутствие заболевание время от времени рекомендуется каждому человеку. При своевременном обнаружении болезни терапия будет более эффективной и сведет к минимуму риск развития плачевных последствий.

Лабораторная диагностика использует сразу несколько тестов на сифилис для получения максимально точного результата. Это занимает больше времени, но зато даёт наиболее точный ответ.

Чаще всего результат анализа РИФ представляют цифрами. Расшифровка имеет следующие обозначения:

• резко положительный результат обозначается 4 плюсами (++++);
• положительный результат обозначается 3 плюсами (+++);
• слабоположительный результат 2 плюсами (++);
• сомнительный результат 1 плюс (+);
• отрицательный результат обозначается 1 минусом (-).

Результат РИФ на сифилис также представляется в процентном варианте, который зависит от количественного показателя связанных бактерий:

• при отрицательном результате иммобилизация до 20%;
• при слабоположительном результате иммобилизация варьирует от 20 до 50%;
• при положительном результате иммобилизация выше 50%.

Если результат выдал положительный ответ, то это констатирует наличие заболевания.

Если результат слабоположительный , то это указывает на единичное количество остаточных антител в крови.

Отрицательный результат говорит об отсутствии бледной трепонемы, а это означает, что пациент здоров.

Опытные врачи нашей клиники проведут диагностику сифилиса быстро и с высокой точностью показаний. Мы социально ориентированы на все слои населения, поэтому стоимость анализа РИФ недорогая . Цена представлена в таблице на нашем сайте.

Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.

Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» - искусственно созданный).

Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.

Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.

Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.

Показать всё

1. Классификация методов лабораторной диагностики

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

1. 1 Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
2. 2 Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
3. 3 Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

1.1. Прямые методы

1. 1 Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
2. 2 Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
3. 3 ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
4. 4 ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

1.2. Непрямые методы

Серологические реакции - это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

1. 1 Нетрепонемные тесты:
   • Реакция Вассермана (РСК);
   • Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
   • Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
   • Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
   • Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней - VDRL.
2. 2 Трепонемные тесты:
   • Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
   • Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
   • Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
   • Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
   • Иммуноблоттинг.



Рисунок 1 - Алгоритм серодиагностики сифилиса

1.3. Гистоморфологические методы

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.



Рисунок 2 - Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации - CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе - амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество - позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

5. Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

1. 1 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
2. 2 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
3. 3 Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
4. 4 Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

1. 1 Относительно маленькая стоимость производства тестов;
2. 2 Получение быстрого ответа;
3. 3 Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

1. 1 Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
2. 2 Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
3. 3 Злокачественные новообразования.
4. 4 Вирусные и бактериальные инфекции.
5. 5 Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
6. 6 Беременность.
7. 7 Употребление алкоголя.
8. 8 Приём жирной пищи.
9. 9 Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.



Рисунок 2 - Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

9. VDRL

Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).

Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL - это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.

Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.

Преимущества VDRL:

1. 1 сравнительно высокая чувствительность;
2. 2 сравнительно высокая специфичность;
3. 3 легкость выполнения;
4. 4 малая стоимость реактивов;
5. 5 получение быстрого ответа.

Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.

Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.

Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация - РПГА, ИФА, РИФ).

Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.

10. РИФ

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные - более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

11. РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

1. 1 От 0 до 20 - отрицательная проба.
2. 2 От 21 до 50 - слабоположительная проба.
3. 3 От 50 до 100 - положительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

12. РПГА

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.



Рисунок 3 - Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

12.1. Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

13. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.



Рисунок 4 - Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

14. Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.



Таблица 1 - Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

1. 1 Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
2. 2 Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
3. 3 Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
4. 4 Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
5. 5 Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Анализ на сифилис делают, применяя множество методик обнаружения возбудителя. При развитии патологии проявляется большое количество специфических признаков, поэтому с целью установления точного диагноза больного человека обследуют комплексно. Общий анализ крови при этом малоинформативен, его не используют при диагностировании данной венерической инфекции.

Виды исследований и биоматериалов для анализа

Для выявления болезни используют различные методики и биоматериалы. На ранних этапах сифилис определяют с помощью бактериоскопического теста. Образцы исследуют под микроскопом. Прибор позволяет обнаружить штаммы возбудителя. Позднее проводят серологические анализы крови. Благодаря им, в пробах выявляют антигены и антитела сифилиса.

Способы определения половой инфекции поделены на 2 категории:

• Прямые, выявляющие патогенный микроорганизм. К ним относят: темнопольная микроскопия, RIT-анализ (инфицирование кроликов биоматериалом для исследования), метод ПЦР – полимеразной цепной реакции (с его помощью находят генетические элементы возбудителя).
• Непрямые (серологические) позволяют обнаружить антитела к патогену. Они продуцируются иммунной системой, как ответная реакция на заражение.

Серологические методики поделены на 2 категории: трепонемные и нетрепонемные.

• Нетрепонемные, включающие: тест с толуидиновым красным, анализ РСК, RPR- тест, исследование крови экспресс-методом РМП.
• Трепонемные, включающие: иммуноблоттинг, РСК-тест, РИТ-анализ, исследование РИФ, РПГА-тест, ИФА-анализ.

Информативность тестов на инфекцию различна. Чаще делают основные виды анализов на сифилис, к которым отнесены серологические методики.

Биоматериал для исследования

Чтобы выявить бледную трепонему – патогена, который выглядит, как спираль и вызывает сифилис, берут пробы:

• венозной крови;
• ликвора (секрета из спинномозгового канала);
• содержимое лимфатических узлов;
• ткани изъязвлений.

Если необходимо провести тесты на обнаружение сифилиса, кровь сдают не только из локтевой вены, но и из пальца. На выбор биоматериала и способ исследования влияет тяжесть течения инфекции и оснащенность диагностического центра.

Прямые исследования

Убедительным доказательством сифилиса является выявление возбудителей инфекции под микроскопом. Таким способом находят патоген у 8 обследуемых из 10. Отрицательный результат у 2 оставшихся пациентов не говорит о том, что они не инфицированы.

Исследование делают на первичном и вторичном этапе (стадии) заболевания, для которых характерно появление высыпаний на коже и сифилом (изъязвлений) на эпителиальных тканях или слизистых оболочках. В отделяемом из очагов поражения находят патогены, вызывающие венерическое заболевание.

Точнее с определением трепонем справляется сложный тест, обозначающийся как РИФ – реакция иммунофлуоресценции. Образец для исследования предварительно обрабатывают флуоресцентными антителами. Соединения, способные светиться, склеиваются с бактериями. Рассматривая под микроскопом образцы, в случае заражения лаборант видит сверкающих возбудителей.

Тест используют для раннего диагностирования болезни. Чем дольше длится заболевание, тем ниже чувствительность исследовательских способов. Кроме того, она падает после обрабатывания высыпаний и язв антисептическими средствами и у пациентов, прошедших лечение. Изредка исследование дает ложноотрицательные и ложноположительные результаты.

RIT-анализ – высокоточный способ обнаружения сифилиса. При проведении теста результаты приходится ждать долго. До тех пор, пока у инфицированного кролика не проявятся признаки инфекции. Тест применяют очень редко, несмотря на то, что он сверхточен.

С помощью полимеразной цепной реакции на сифилис определяют генетические элементы патогенов. Единственный недостаток ПЦР – дороговизна.

Нетрепонемные тесты

Такие анализы крови помогают выявить антитела, появляющиеся в ответ на кардиолипин – соединение, относящееся к общему строению мембран патогенов.

Реакция Вассермана (РВ или RW)

Самым известным исследованием на сифилис считается реакция Вассермана. РВ входит в категорию реакций связывания комплемента (РСК). Новые методы РСК обладают существенными отличиями от традиционной RW. Но обозначаются они, как и раньше понятием «реакция Вассермана».

Иммунная система, синтезирует антитела (маркеры) в ответ на вторжение трепонем. Их выявляют при анализе крови на сифилис методом реакции Вассермана. Положительный результат RW подтверждает инфицирование обследуемого.

Реакция гемолиза – индекс РВ анализа. При ней взаимодействуют 2 субстанции: гемолитическая сыворотка и эритроциты барана. Сыворотку делают, иммунизируя кролика эритроцитами барана. Активность биологической жидкости снижают путем прогревания.

Показатели РВ зависят от того, прошел гемолиз или нет. В пробе чистой от маркеров происходит гемолиз. При этом реакция на антигены невозможна. Комплемент тратится на взаимодействие с бараньими эритроцитами. Когда в образце есть маркеры, комплимент вступает в реакцию с антигенами. В этом случает гемолиз не протекает.