Помощь по Теле2, тарифы, вопросы

Первоначальный смысл понятия "атеросклероз", предложенного Маршаном в 1904 г., сводился лишь к двум типам изменений: скоплению жировых веществ в виде кашицеобразных масс во внутренней оболочке артерий (от греч. athere - каша) и собственно склерозу - соединительнотканному уплотнению стенки артерий (от греч. scleras - твердый). Современное толкование атеросклероза гораздо шире и включает в себя... "различные сочетания изменений интимы артерий, проявляющиеся в виде очагового отложения липидов, сложных соединений углеводов, элементов крови и циркулирующих в ней продуктов, образования соединительной ткани и отложения кальция" (определение ВОЗ).

Склеротически измененные сосуды (наиболее частая локализация - аорта, артерии сердца, мозга, нижних конечностей) отличаются повышенной плотностью и хрупкостью. Вследствие снижения эластических свойств они не в состоянии адекватно изменять свой просвет в зависимости от потребности органа или ткани в кровоснабжении.

Первоначально функциональная неполноценность склеротически измененных сосудов, а следовательно, органов и тканей обнаруживается только при предъявлении к ним повышенных требований, т. е. при увеличении нагрузки. Дальнейшее прогрессирование атеросклеротического процесса может привести к снижению работоспособности и в состоянии покоя.

Сильная степень атеросклеротического процесса, как правило, сопровождается сужением и даже полным закрытием просвета артерий. При медленном склерозировании артерий в органах с нарушенным кровоснабжением происходят атрофические изменения с постепенным замещением функционально активной паренхимы соединительной тканью.

Быстрое сужение или полное перекрытие просвета артерии (в случае тромбоза, тромбоэмболии или кровоизлияния в бляшку) ведет к омертвению участка органа с нарушенным кровообращением, т. е. к инфаркту. Инфаркт миокарда - наиболее часто встречающееся и наиболее грозное осложнение атеросклероза венечных артерий.

Экспериментальные модели. В 1912 г. Н. Н. Аничков и С. С. Халатов предложили способ моделирования атеросклероза у кроликов путем введения внутрь холестерина (через зонд или посредством примешивания к обычному корму). Выраженные атеросклеротические изменения развивались через несколько месяцев при ежедневном применении 0,5 - 0,1 г холестерина на 1 кг массы тела. Как правило, им сопутствовало повышение уровня холестерина в сыворотке крови (в 3 - 5 раз по сравнению с исходным уровнем), что явилось основанием для предположения о ведущей патогенетической роли в развитии атеросклероза гиперхолестеринемии . Эта модель легко воспроизводима не только у кроликов, но и у кур, голубей, обезьян, свиней.

У собак и крыс, резистентных к действию холестерина, атеросклероз воспроизводится путем комбинированного влияния холестерина и метилтиоурацила, который подавляет функцию щитовидной железы. Такое сочетание двух факторов (экзогенного и эндогенного) ведет к длительной и резкой гиперхолестеринемии (свыше 26 ммоль/л - 100 мг%). Добавление к пище сливочного масла и солей желчных кислот также способствует развитию атеросклероза.

У кур (петухов) экспериментальный атеросклероз аорты развивается после длительного (4 - 5 мес) воздействия диэтилстильбэстролом. В этом случае атеросклеротические изменения появляются на фоне эндогенной гиперхолестеринемии, возникающей вследствие нарушения гормональной регуляции обмена веществ.

Этиология. Приведенные экспериментальные примеры, а также наблюдение над спонтанным атеросклерозом человека, его эпидемиологией свидетельствуют о том, что данный патологический процесс развивается вследствие комбинированного действия ряда факторов (средовых, генетических, пищевых). В каждом отдельном случае на первый план выступает какой-нибудь один из них. Различают факторы, вызывающие атеросклероз, и факторы, способствующие его развитию.

На рис. 19.12 приведен перечень основных этиологических факторов (факторов риска) атерогенеза. Часть из них (наследственность, пол, возраст) относятся к эндогенным. Они проявляют свое действие с момента рождения (пол, наследственность) или на определенном этапе постнатального онтогенеза (возраст). Другие факторы относятся к экзогенным. С их действием организм человека сталкивается в самые различные возрастные периоды.

Роль наследственного фактора в возникновении атеросклероза подтверждают статистические данные о высокой частоте ишемической болезни сердца в отдельных семьях, а также у однояйцевых близнецов. Речь идет о наследственных формах гиперлипопротеидемии, генетических аномалиях клеточных рецепторов к липопротеидам.

Пол. В возрасте 40 - 80 лет атеросклерозом и инфарктом миокарда атеросклеротической природы мужчины болеют чаще, чем женщины (в среднем в 3 - 4 раза). После 70 лет заболеваемость атеросклерозом среди мужчин и женщин примерно одинакова. Это свидетельствует о том, что заболеваемость атеросклерозом среди женщин приходится на более поздний период. Указанные различия связаны, с одной стороны, с более низким исходным уровнем холестерина и содержанием его в основном во фракции неатерогенных а-липопротеидов сыворотки крови женщин, а с другой - с антисклеротическим действием женских половых гормонов. Снижение функции половых желез в связи с возрастом или по какой-либо другой причине (удаление яичников, их облучение) обусловливает увеличение в сыворотке крови уровня холестерина и резкое прогрессирование атеросклероза.

Предполагают, что защитное действие эстрогенов сводится не только к регуляции содержания холестерина в сыворотке крови, но и других видов обмена в артериальной стенке, в частности окислительного. Такое антисклеротическое действие эстрогенов проявляется преимущественно по отношению к венечным сосудам.

Возраст. Резкое увеличение частоты и тяжести атеросклеротического поражения сосудов в связи с возрастом, особенно заметное после 30 лет (см. рис. 19.12 ), породило у некоторых исследователей представление о том, что атеросклероз - функция возраста и является исключительно биологической проблемой [Давыдовский И. В., 1966]. Этим объясняется пессимистическое отношение к практическому решению проблемы в перспективе. Большинство исследователей, однако, придерживаются мнения, что возрастные и атеросклеротические изменения сосудов - это различные формы артериосклероза, особенно на поздних стадиях их развития, но возрастные изменения сосудов способствуют его развитию. Способствующее атеросклерозу действие возраста проявляется в виде местных структурных, физико-химических и биохимических изменений артериальной стенки и общих нарушений обмена веществ (гиперлипемия, гиперлипопротеидемия, гиперхолестеринемия) и его регуляции.

Избыточное питание. Экспериментальные исследования Н. Н. Аничкова и С. С. Халатова позволили предположить важность этиологической роли в возникновении спонтанного атеросклероза избыточного питания, в частности, избыточного поступления пищевых жиров. Опыт стран с высоким жизненным уровнем убедительно доказывает, что чем больше удовлетворяется потребность в энергии за счет животных жиров и содержащих холестерин продуктов, тем выше содержание холестерина в крови и процент заболеваемости атеросклерозом. Напротив, в странах, где на долю жиров животного происхождения приходится незначительная часть энергетической ценности суточного рациона (около 10%), заболеваемость атеросклерозом низкая (Япония, Китай).

В соответствии с разработанной в США программой, основанной на этих фактах, уменьшение потребления жиров с 40% от общего калоража до 30% к 2000 г. должно снизить смертность от инфаркта миокарда на 20 - 25%.

Стресс. Заболеваемость атеросклерозом выше среди людей "стрессовых профессий", т. е. профессий, требующих длительного и сильного нервного напряжения (врачи, учителя, преподаватели, работники управленческого аппарата, летчики и др.).

В целом заболеваемость атеросклерозом выше среди городского населения по сравнению с сельским. Это может быть объяснено тем, что в условиях большого города человек чаще подвергается нейрогенным стрессовым влияниям. Эксперименты подтверждают возможную роль нервно-психического стресса в возникновении атеросклероза. Сочетание диеты, содержащей большое количество жиров, с нервным напряжением должно рассматриваться как неблагоприятное.

Гиподинамия. Малоподвижный образ жизни, резкое уменьшение физической нагрузки (гиподинамия), свойственные человеку второй половины XX в., - еще один важный фактор атерогенеза. В пользу этого положения свидетельствуют меньшая заболеваемость атеросклерозом среди работников физического труда и большая - у лиц, занимающихся умственным трудом; более быстрая нормализация уровня холестерина в сыворотке крови после избыточного поступления его извне под действием физической нагрузки.

В эксперименте обнаружены выраженные атеросклеротические изменения в артериях кроликов после помещения их в специальные клетки, значительно уменьшающие их двигательную активность. Особенную атерогенную опасность представляет сочетание малоподвижного образа жизни и избыточного питания.

Интоксикация . Влияние алкоголя, никотина, интоксикация бактериального происхождения и интоксикация, вызванная различными химическими веществами (фториды, СO, H 2 S, свинец, бензол, соединения ртути), также являются факторами, способствующими развитию атеросклероза. В большинстве рассмотренных интоксикаций отмечались не только общие нарушения жирового обмена, свойственные атеросклерозу, но и типичные дистрофические и инфильтративно-пролиферативные изменения в артериальной стенке.

Артериальная гипертензия самостоятельного значения фактора риска, по-видимому, не имеет. Об этом свидетельствует опыт стран (Япония, Китай), население которых часто болеет гипертонической болезнью и редко - атеросклерозом. Однако повышенное артериальное давление приобретает значение способствующего развитию атеросклероза

фактора в комбинации с другими, особенно если оно превышает 160/90 мм рт. ст. Так, при одинаковом уровне холестерина заболеваемость инфарктом миокарда при гипертензии в пять раз выше, чем при нормальном артериальном давлении. В эксперименте на кроликах, в пищу которых добавляли холестерин, атеросклеротические изменения развиваются быстрее и достигают большей степени на фоне гипертензии.

Гормональные нарушения, болезни обмена веществ. В некоторых случаях атеросклероз возникает на фоне предшествующих гормональных нарушений (сахарный диабет, микседема, понижение функции половых желез) или болезней обмена веществ (подагра, ожирение, ксантоматоз, наследственные формы гиперлипопротеидемии и гиперхолестеринемии). Об этиологической роли гормональных нарушений в развитии атеросклероза свидетельствуют и приведенные выше опыты по экспериментальному воспроизведению этой патологии у животных путем влияния на эндокринные железы.

Патогенез. Существующие теории патогенеза атеросклероза можно свести к двум, принципиально отличающимся по своим ответам на вопрос: что первично, а что вторично при атеросклерозе, другими словами, что является причиной, а что следствием - липоидоз внутренней оболочки артерий или дегенеративно-пролиферативные изменения последней. Этот вопрос впервые был поставлен Р. Вирховым (1856). Он же первый и ответил на него, указав, что "при всех условиях процесс, вероятно, начинается с определенного разрыхления соединительнотканного основного вещества, из которого большей частью состоит внутренний слой артерий".

С тех пор и берет начало представление немецкой школы патологов и ее последователей в других странах, согласно которому при атеросклерозе первоначально развиваются дистрофические изменения внутренней оболочки стенки артерий, а отложение липидов и солей кальция - явление вторичного порядка. Преимуществом данной концепции является то, что она в состоянии объяснить развитие спонтанного и экспериментального атеросклероза как в тех случаях, когда имеются выраженные нарушения холестеринового обмена, так и при их отсутствии. Первостепенную роль авторы указанной концепции отводят артериальной стенке, т. е. субстрату, который непосредственно вовлекается в патологический процесс. "Атеросклероз является не только и даже не столько отражением общих обменных сдвигов (лабораторно они могут быть даже неуловимы), сколько производным собственных структурных, физических и химических превращений субстрата артериальной стенки... Первичный фактор, ведущий к атеросклерозу, лежит именно в самой артериальной стенке, в ее структуре и в ее энзимной системе" [Давыдовский И. В., 1966].

В противоположность этим взглядам со времени опытов Н. Н. Аничкова и С. С. Халатова, главным образом благодаря исследованиям отечественных и американских авторов, успешно развивается концепция о роли в развитии атеросклероза общих метаболических нарушений в организме, сопровождающихся гиперхолестеринемией, гипер- и дислипопротеидемией. С этих позиций, атеросклероз - следствие первичной диффузной инфильтрации липидов, в частности холестерина, в неизмененную внутреннюю оболочку артерий. Дальнейшие изменения в сосудистой стенке (явления мукоидного отека, дистрофические изменения волокнистых структур и клеточных элементов подэндотелиального слоя, продуктивные изменения) развиваются в связи с наличием в ней липидов, т. е. являются вторичными.

Первоначально ведущая роль в повышении уровня липидов, особенно холестерина, в крови приписывалась алиментарному фактору (избыточному питанию), что дало название и соответствующей теории возникновения атеросклероза - алиментарной . Однако очень скоро ее пришлось дополнить, так как стало очевидным, что не все случаи атеросклероза можно поставить в причинную связь с алиментарной гиперхолестеринемией. Согласно комбинационной теории Н. Н. Аничкова, в развитии атеросклероза, кроме алиментарного фактора, имеют значение эндогенные нарушения липидного обмена и его регуляции, механическое влияние на стенку сосуда, изменения артериального давления, главным образом его повышение, а также дистрофические изменения в самой артериальной стенке. В этой комбинации причин и механизмов атерогенеза одни (алиментарная и/или эндогенная гиперхолестеринемия) играют роль инициального фактора. Другие либо обеспечивают увеличенное поступление холестерина в стенку сосуда, либо уменьшают его экскрецию из нее через лимфатические сосуды.

В крови холестерин содержится в составе хиломикронов (мелкодисперсных частиц, не растворенных в плазме) и липопротеидов - надмолекулярных гетерогенных комплексов триглицеридов, эфиров холестерина (ядро), фосфолипидов, холестерина и специфических белков (апопротеиды: АПО А, В, С, Е), образующих поверхностный слой. Существуют определенные отличия липопротеидов по размерам, соотношению ядра и оболочки, качественному составу и атерогенности.

Выделены 4 основные фракции липопротеидов плазмы крови в зависимости от плотности и электрофоретической подвижности.

Обращает на себя внимание высокое содержание белка и низкое - липидов во фракции липопротеидов высокой плотности (ЛПВП - α-липопротеиды) и, наоборот, низкое содержание белка и высокое - липидов во фракциях хиломикронов, липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП - пре- β -липопротеиды) и липопротеидов низкой плотности (ЛПНП - β-липопротеиды).

Таким образом, липопротеиды плазмы крови осуществляют доставку синтезированных и полученных с пищей холестерина и триглицеридов к местам их использования и депонирования.

ЛПВП оказывают антиатерогенное действие путем обратного транспорта холестерина из клеток, в том числе из сосудов, к печени с последующим выведением из организма в форме желчных кислот. Остальные фракции липопротеидов (особенно ЛПНП) являются атерогенными, обусловливая избыточное накопление холестерина в стенке сосудов.

В табл. 5 приведена классификация первичных (генетически обусловленных) и вторичных (приобретенных) гиперлипопротеидемий с той или иной степенью выраженности атерогенного действия. Как следует из таблицы, в развитии атероматозных изменений сосудов основную роль играют ЛПНП и ЛПОНП, их повышенная концентрация в крови, избыточное поступление в интиму сосудов.

Избыточный транспорт ЛПНП и ЛПОНП в сосудистую стенку прошествует повреждению эндотелия.

В соответствии с концепцией американских исследователей И. Голдстайна и М. Брауна, ЛПНП и ЛПОНП в клетки поступают путем взаимодействия со специфическими рецепторами (АПО В, Е-реиепторы-гликопротеиды), после чего происходит их эндоцитозный захват и слияние с лизосомами. При этом ЛПНП расщепляются на белки и эфиры холестерина. Белки расщепляются на свободные аминокислоты, которые покидают клетку. Эфиры холестерина подвергаются гидролизу с образованием свободного холестерина, который поступает из лизосом в цитоплазму с последующим использованием для тех или иных целей (образование мембран, синтез стероидных гормонов и т. д.). Важно, что этот холестерин угнетает его синтез из эндогенных источников, при избытке образует "запасы" в форме эфиров холестерина и жирных кислот, но, самое главное, по механизму обратной связи угнетает синтез новых рецепторов для атерогенных липопротеидов и их дальнейшее поступление в клетку. Наряду с регулируемым рецепторопосредованным механизмом транспорта ЛП, обеспечивающим внутренние потребности клеток в холестерине, описан межэндотелиальный транспорт, а также так называемый нерегулируемый эндоцитоз, который представляет собой трансцеллюлярный, в том числе трансэндотелиальный везикулярный транспорт ЛПНП и ЛПОНП с последующим экзоцитозом (в интиму артерий из эндотелия, макрофагов, гладкомышечных клеток).

С учетом изложенных представлений механизм начального этапа атеросклероза , характеризующегося избыточным накоплением липидов в интиме артерий, может быть обусловлен:

1. Генетической аномалией рецептор-опосредованного эндоцитоза ЛПНП (отсутствие рецепторов - менее 2% от нормы, уменьшение их числа - 2 - 30% от нормы). Наличие таких дефектов обнаружено при семейной гиперхолестеринемии (гипербеталипопротеидемия II А типа) у гомо- и гетерозигот. Выведена линия кроликов (Ватанабе) с наследственным дефектом рецепторов к ЛПНП.

2. Перегрузкой рецепторопосредованного эндоцитоза при алиментарной гиперхолестеринемии. И в том, и в другом случае наступает резкое усиление нерегулируемого эндоцитозного захвата частиц ЛП эндотелиальными клетками, макрофагами и гладкомышечными клетками стенки сосудов вследствие выраженной гиперхолестеринемии.

3. Замедлением удаления атерогенных липопротеидов из стенки сосудов через лимфатическую систему в связи с гиперплазией, гипертензией, воспалительными изменениями.

Существенный дополнительный момент - различные превращения (модификации) липопротеидов в крови и сосудистой стенке. Речь идет об образовании в условиях гиперхолестеринемии аутоиммунных комплексов ЛП - IgG в крови, растворимых и нерастворимых комплексов ЛП с гликозаминогликанами, фибронектином, коллагеном и эластином в сосудистой стенке (А. Н. Климов, В. А. Нагорнев).

По сравнению с нативными ЛП захват модифицированных ЛП клетками интимы, в первую очередь макрофагами (с помощью нерегулируемых холестерином рецепторов), резко возрастает. Это, как полагают, является причиной превращения макрофагов в так называемые пенистые клетки, которые составляют морфологическую основу стадии липидных пятен и при дальнейшем прогрессировании - атером . Миграция кровяных макрофагов в интиму обеспечивается с помощью моноцитарного хемотаксического фактора, образующегося под действием ЛП и интерлейкина-1, который выделяется из самих моноцитов.

На заключительном этапе формируются фиброзные бляшки как ответ гладкомышечных клеток, фибробластов и макрофагов на повреждение, стимулируемый факторами роста тромбоцитов, эндотелиоцитов и гладкомышечных клеток, а также стадия осложненных поражений - кальцификация , тромбообразование и др. (рис. 19.13 ).

Приведенные выше концепции патогенеза атеросклероза имеют свои сильные и слабые стороны. Наиболее ценным достоинством концепции общих метаболических нарушений в организме и первичного липоидоза артериальной стенки является наличие экспериментальной холестериновой модели. Концепция первичного значения местных изменений в артериальной стенке, несмотря на то что была высказана более 100 лет назад, пока не имеет убедительной экспериментальной модели.

Как видно из изложенного, в целом они могут дополнять друг друга.

Владельцы патента RU 2500041:

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии и касается моделирования атеросклероза, что может быть использовано для изучения диагностики, профилактики и лечения этого заболевания. Для этого лабораторным животным - крысам добавляют в корм порошок холестерина в количестве 1%, маргарин 10%, мерказолил 10 мг/кг и витамин D - 2,5 ME на кг массы тела. Дополнительно животным проводят операцию, состоящую из наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивания верхнего полюса правой почки, оставляя 2/3 органа. Способ легко выполним, не вызывает гибели животных, является адекватной моделью повреждения эндотелия и развития атеросклеротического процесса. 12 ил., 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии, может быть использовано в целях диагностики, профилактики и лечения атеросклеротического процесса.

Атеросклероз и его осложнения продолжают лидировать в структуре заболеваемости и смертности западных стран и России. Летальность при сердечно-сосудистых патологиях в мире вдвое больше, чем от онкологических заболеваний, и в 10 раз выше, чем от несчастных случаев [Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова И.В. и др.// Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2006, №5 (6). - С.129-136; Лупач Н.М., Хлудеева Е.А., Лукьянов П.А. и др. // Российский медицинский журнал. - 2010, №4. С.71-74; Титов В.Н. // Клиническая лабораторная диагностика. 2006, №4. С.310].

Одним из основных факторов риска (ФР) развития атеросклероза является нарушение липидного обмена в организме. Дислипидемия, заключающаяся в снижении α-липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), при повышении β-липопротеинов, или липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), пре-β липопротеинов, или липропротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), способствует развитию атеросклероза. Причем атерогенными свойствами обладают модифицированные, подвергнутые, чаще всего, перекисному окислению, окисленные (окси-ЛПН). Они способствуют повышению синтеза кавеолина-1, что приводит к снижению образования NO эндотелием [Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова И.В. и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2006, №5 (6). - С.129-136; Зотова И.В., Затейщиков Д.А., Сидоренко Б.А. // Кардиология. - 2002, №4. - С.57-67; Титов В.Н. // Клиническая лабораторная диагностика. 2006, №4. С.310]. Окисленные липопротеиды являются активными раздражителями для моноцитов, которые проникают в субэндотелиальное пространство, превращаясь в макрофаги, и затем, по мере накопления в них модифицированных ЛПНП, в пенистые клетки. Активированные макрофаги и пенистые клетки высвобождают биологически активные вещества - факторы роста, противовоспалительные цитокины, молекулы клеточной адгезии, которые способствуют агрегации тромбоцитов, вазоконстрикции и адгезии лейкоцитов, а следовательно, развитию воспалительного процесса в артериальной стенке и прогрессированию атеросклероза. Также окси-ЛПНП индуцируют пролиферацию гладкомышечных клеток (ГМК) сосудов, ЛПВП напротив осуществляют обратный транспорт холестерина (ХС) из сосудистой стенки и макрофагов в печень [Титов В.Н. // Клиническая лабораторная диагностика. 2006, №4. С.310].

Артериальная гипертония (АГ) - второй важный фактор риска развития атеросклероза. Было доказано, что лекарственный контроль давления у гипертоников снижает риск инсультов на 40%, инфаркта миокарда на 8%, а общую летальность от сердечных заболеваний на 10% [Чичерина Е.Н., Милютина О.В. // Клиническая медицина. 2009. - №2. - С.18-21]. При изолированной АГ у мужчин в возрасте 47,5±8,4 г. показатели липидного спектра сдвигаются в сторону повышения общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), ХС ЛПНП, снижения ХС ЛПВП, повышения коэффициента атерогенности (КА) [Овчинникова Л.К., Ягудина Р.И., Овчинникова Е.А. // Российские аптеки. - 2007. - №14. - С.26-31]. Гипертония способствует увеличению проницаемости эндотелия и накоплению липопротеинов в интиме [Шляхто Е.В., Гавришева Н.А., Овчинникова О.А. и др. Влияние индуцированого воспаления на метаболизм коллагена в атеросклеротических бляшках у мышей // Медицинская иммунология. 2008, №6. С.507-512]. Доказано, что причина активации перекисного окисления (ПО) белков и липидов у крыс со спонтанной АГ состоит в усилении продукции кислородных радикалов и неэффективности эндогенных систем их инактивации. Известно также, что развитие спонтанной АГ у крыс сопровождает синдром системного воспалительного ответа: его начальной стадией являются активация (прайминг) полиморфно-ядерных лейкоцитов (нейтрофилов), усиление продукции и секреции ими активных форм О 2 - и Н 2 О 2 и интенсификации ПО белков и заодно жирных кислот (ЖК). Реакция О 2 - с оксидом азота (NO) с образует ONOO- и лишает NO его биологического действия как фактора релаксации. Снижение NO приводит к усилению АД по типу развития порочного круга [Зотова И.В., Затейщиков Д.А., Сидоренко Б.А. // Кардиология. - 2002, №4. - С.57-67].

С современных позиций ключевым звеном в патогенезе атеросклероза считается эндотелиальная дисфункция (ЭД), которая является дисбалансом между основными функциями эндотелия: вазодилатацией и вазоконстрикцией, ингибированием и содействием пролиферации, антитромботической и протромботической, антиокислительной и проокислительной [Лупач Н.М., Хлудеева Е.А., Лукьянов П.А. и др. // Российский медицинский журнал. - 2010, №4. С.71-74; Allison В. Reiss, Amy D. // Journal of investigative medicine. 2006. Vol.54, N. 3. P.123-131; Huber S.A, Sakkinen P., David С.// Circulation. 2001. - N. 103. - P. 2610-2616]. Оксид азота является важным регулятором в сердечно-сосудистой системе, мессенджер, опосредующий ауто- и паракринное влияние. В организме реакция синтеза NO катализируется семейством NO-синтаз (NOS). NOS используют L-аргинин в качестве субстрата и NADPH-диафоразу в качестве кофактора. NADPH-диафораза участвует в транспортировке электронов к простетической группе энзима. Определение NADPH-диафоразы основано на образовании диформазана в присутствии эндогенного β-NADPH и солей тетразолия [Зотова И.В., Затейщиков ДА., Сидоренко Б.А. // Кардиология. 2002, №4. С.57-67; Шуматова Т.А., Приходченко Н.Г., Григорян Л.А. и др. //Тихоокеанский медицинский журнал. 2010, №3. С.59-61; Allison В. Reiss, Amy D. Glass // Journal of investigative medicine. 2006. Vol.54, N. 3. P.123-131].

Данными клинических и эпидемиологических исследований доказано патогенетическое влияние гипертонической болезни и гиперлипидемии на сосудистую стенку, однако четко не установлен период формирования ЭД при совместном действии этих факторов в условиях эксперимента [Овчинникова Л.К., Ягудина Р.И., Овчинникова Е.А. // Российские аптеки. - 2007. - №14. - С.26-31; Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова И.В., Хорева М.А. и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2006. - №5(6). - 129-136; Нагорнев В.А., Воскаянц А.Н. // Вестн. РАМН, 2006. - №9-10. С.66-74; Davignon J. Ganz P. //Circulation. - 2004; 109: 27-32].

Экспериментальные модели на животных играют важную роль в исследовании заболеваний, в том числе и атеросклероза. Крысы часто используются в моделировании гиперлипидемии, как фактора риска атеросклероза [Мещерская К.А., Бородина Г.П., Королева Н.П. О методике отбора средств, влияющих на обмен холестерина. // Элеутерококк и другие адаптогены из дальневосточных растений. / Под ред. К.А.Мещерской. - Владивосток, 1966. - С.289-294; Санникова А.А., Н.Н.Чучкова, Гайсина Э.Ш. Иммуномодулирующее действие глюкозаминилмурамилдипептида при измененном липидном обмене и атеросклерозе. // Вестник Уральской медицинской экономической науки. - 2008. - №1. - С.64-66. 10; Юдина Т.П., Чаревач Е.И., Цыбулько Е.И., Масленникова Е.В., Плаксен Н.В. Гиполипидемическое действие комплексного эмульгатора, содержащего водоросль ламиналь и водный экстракт из корней мыльнянки Sa ponaria officinalis L., в эксперименте на крысах.// Вопросы питания. - 2008. - Т. 77, №2. - С.76-79]. Их приобретение и содержание относительно недороги, животные просты в обращении, хорошо размножаются в неволе. Из всех экспериментальных животных у крыс лучше всего изучен метаболизм [Куликов В.А., Чиркин А.А. Особенности метаболизма липопротеинов у крыс // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2004. - №1. - С.26-27].

Однако вышеперечисленные исследователи оценивали изменение лишь липидного состава крови в течение небольшого срока наблюдения (от 16 дней до 3 месяцев), в моделях отсутствуют данные о морфологических и функциональных изменениях стенки сосудов, не учитывается включение долговременных компенсаторных механизмов, препятствующих формированию сосудистого поражения.

Известны способы моделирования атеросклероза (п. RU №2033646; кл. G09В 23/28, 1995; п. RU №2327228, кл. G09В 23/28, 2008, бюл. №17; п. RU №2127113, кл. А61К 31/70, А61К 31/505, 1999).

Однако вышеупомянутые способы предусматривают введение медикаментозных препаратов (обзидана - 1 мг на 100 г массы, суспензии гидрокортизона ацетата - 1,5 мг на 100 г массы животного, уридина в дозе 50 мг на 1 кг массы тела один раз в сутки в течение 6-8 дней) на фоне диеты, обогащенной жирами, искусственно изменяют метаболизм животного и неадекватно отражают формирование естественных патогенетических механизмов, играющих ключевую роль в развитии атеросклероза.

За прототип принято моделирование гиперлипидемии у крыс на протяжении длительного времени [Кропотов А.В. Влияние цимифуги даурской и калужницы лесной на некоторые показатели обмена липидов и половую систему (экспериментальное исследование). Автореф. дисс.на соискание ученой степени кандидата мед. наук, Владивосток - 1975, стр.5]. Известный метод придает диете выраженные атерогенные свойства. Крысы находятся на диете с избыточным содержанием жиров в течение 7 месяцев. В корм животных добавляют порошок холестерина в количестве 1%, маргарина 10%, мерказолила 10 мг/кг и витамина D в количестве 2,5 ME на кг массы тела крысы.

Однако в прототипе не оценивалось изменение функциональных и морфологических свойств эндотелия сосудов, исследователи наблюдали лишь изменения липидного спектра в крови и в биоптатах печени крыс.

Учитывая особенности обменных процессов крыс, способствующих формированию их резистентности к жировой нагрузке, авторы изобретения применили сочетание гиперлипидемии с артериальной гипертензией для наиболее выраженного повреждения эндотелия. Способ усиливает нарушение процессов обмена холестерина, формирование стойких признаков атеросклеротического повреждения сосудов с учетом включения срочных и долговременных компенсаторных механизмов.

Задача заявляемого изобретения - разработать экспериментальную модель эндотелиальной дисфункции на основе изучения сочетанного влияния гиперлипидемии и артериальной гипертензии на морфологическую структуру сосудов крыс.

Поставленная задача заявляемого способа достигается путем комбинации вскармливания лабораторных животных атерогенным рационом, состоящим из добавления в корм порошка холестерина в количестве 1%, 10% маргарина, 10 мг/кг мерказолила, и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крысы, и проведения операции, включающей наложение лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивание верхнего полюса правой почки, при этом оставляя 2/3 органа, что способствует развитию стойкой реноваскулярной артериальной гипертензии. В ходе эксперимента были выполнены следующие этапы:

Проведен мониторинг состояния липидного обмена сыворотки крови при изолированной экспериментальной гиперлипидемии (ЭГ) и при комплексном воздействии атерогенной диеты и артериальной гипертензии (Д+АГ).

Мониторирование уровня артериального давления в моделях ЭГ и Д+АГ.

Определение активности NADPH-диафоразы в эндотелии аорты, бедренных артерий и микрососудах передней брюшной стенки (ПБС) в двух экспериментальных моделях.

Оценка состояния просвета сосудов у экспериментальных животных методом компьютерной магнито - резонансной томографии (МРТ).

Технический результат заявляемого способа заключается в получении стойких структурных нарушений сосудистой стенки, по сравнению с изолированной атерогенной диетой, в целях создания модели атеросклероза на лабораторных животных для диагностики, профилактики и лечения атеросклероза.

Сущность заявляемого изобретения состоит в сочетании гиперлипедемии и реноваскулярной гипертензии у лабораторных крыс.

Гиперлипидемия достигнута с помощью добавления в корм порошка холестерина в количестве 1%, 10% маргарина, 10 мг/кг мерказолила и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крысы.

Реноваскулярная гипертензия осуществлялась путем наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошиванием верхнего полюса правой почки (оставляя 2/3 органа).

Данная методика позволяет получить стойкие структурные нарушения сосудистой стенки, по сравнению с изолированной экспериментальной гиперлипидемией.

Сущность заявляемого способа поясняется чертежами, где на фиг.1 а-1 в изображено увеличение у опытных крыс ширины общей сонной артерии, плечеголовного ствола и грудной части аорты, соответственно, на 2 месяце исследования, на фиг.2 показано в моделе Д+АГ определение неравномерного контрастирования артерий, что предполагает локальные атерогенные изменения стенки артерий, на фиг.3 - в аорте опытных крыс при окраске гематоксилином и эозином показаны изменения архитектоники эластических волокон, смещение ядер миоцитов на периферию, их уплотнение, клеточная инфильтрация стенки, утолщение эндотелия, Увеличение×400 (камера A×Cam MRc, Германия), окраска гематоксилин и эозин, на фиг.4 визуализируются перинуклеарные оптически пустые образования, увеличение×400 (камера A×Cam MRc, Германия), окраска гематоксилин и эозин; на фиг.5 - окраска гематоксилином и эозином аорта (контроль), увеличение×100 (камера A×Cam MRc, Германия), окраска гематоксилин и эозин; на фиг.6 в бедренных артериях визуализируются перинуклеарные оптически пустые образования увеличение×400, Окраска гематоксилин и эозин; на фиг.7 - окраска гематоксилином и эозином бедренная артерия (контроль), увеличение×400 (камера A×Cam MRc, Германия) окраска гематоксилин и эозин; на фиг.8 - в группе крыс с Д+АГ при окраске аорты Суданом 4 (по методу Окамото), изображена инфильтрация сосуда жировыми включениями, окраска сосудов по методу Окамото, увеличение×100; на фиг.9 в группе крыс с Д+АГ при окраске бедренной артерии Суданом 4 (по методу Окамото) показана инфильтрация сосуда жировыми включениями, увеличение×400; на фиг.10изображен график толщены стенки и интимы аорты и бедренных артерий крыс в модели гиперлипидемии (I группа) и в комплексной модели: гиперлипидемии и артериальной гипертензии (II группа).

Пример конкретного исполнения

Материалом для экспериментальных исследований явились крысы линии Вистар - 45 самцов массой 200-250 г. Животные были распределены на 2 группы:

1 группа - 15 крыс-самцов находились на холестериновой диете в течение 6 месяцев (прототип). Диета заключалась в добавлении в корм порошка холестерина в количестве 1%, 10% маргарина, 10 мг/кг мерказолила и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крысы.

2 группа 15 крыс-самцов за 15 дней перед началом кормления аналогичным атерогенным рационом (добавление в корм порошка холестерина в количестве 1%, 10% маргарина, 10 мг/кг мерказолила, и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крыс) была произведена операция - наложение лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивание верхнего полюса правой почки, оставляя 2/3 органа (заявляемый способ). Данная операция развивает стойкую реноваскулярную артериальную гипертензию к 8-10 неделе эксперимента.

III группа - контрольная - 15 здоровых крыс-самцов питались обычным рационом. Через 6 месяцев исследования животных каждой группы выводили из эксперимента под эфирным наркозом путем декапитации. Проводили забор сыворотки крови, фрагментов аорты, бедренных артерий и ПБС. Эксперимент осуществлялся со строгим соблюдением требований Европейской конвенции (Страсбург, 1986) по содержанию, кормлению и уходу за подопытными животными, а также выводу их из эксперимента и последующей утилизации. В постановке опытов руководствовались требованиями Всемирного общества защиты животных (WSPA) и Европейской конвенции по защите экспериментальных животных. Исследование одобрено междисциплинарным этическим комитетом (протокол №4, дело №21 от 24.01.2011).

Определение содержание ОХ; ТГ; холестерина ЛПНП, ЛПВП проводили с помощью стандартного колориметрического метода с использованием реагентов «Ольвекс диагностикум» (Россия).

Артериальное давление измеряли в хвостовой артерии с помощью анализатора MLU/ 4С 501 (MedLab КНР). Во время опыта животные находились под наркозом, который избавил их от переживаний и связанных с ними скачков давления.

Метод магниторезонансной томографии заключается в следующем.

Животных перед сканированием усыпляли растворами рометара (Xylazinum, SPORA, PRAHA) в концентрации 1 мг/мл и реланиума в концентрации 2 мг/мл, внутрибрюшинно. МРТ диагностика выполнена на томографе для экспериментальных исследований «PharmaScan US 70/16» (Bruker, Германия) с напряженностью магнитного поля 7,0 Тесла, частотой 300 MHz и катушкой типа BGA 09P. Для ангиографии использовали протокол Head_Angio со следующими параметрами: TR/TE=50.0/5.6; угол наклона 25,0; поле изображения 3,0/3,0/3,0; эффективная толщина среза 30 мм; перекрытие 30,0 мм; матрица 256/256/64 элементов; одно усреднение сигнала, время сканирования 14 мин.

Гистологические препараты фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, Ван-Гизон, Маллори и суданом-4 (Метод Окамото). Описание микропрепаратов проводилось на микроскопе Olympus BX 41. Снимки делались электронной камерой Olympus DP 12, при постоянном увеличении на 100 и на 400. Морфометрия проводилась с использованием окуляр-микрометра MOB - 1-16 ×.

В эксперименте использован гистохимический метод на NADPH-диафоразу по стандартной прописи Hope, Vincent (1989): фрагменты сосудов животных выделяли с помощью лезвия и опускали в охлажденный, приготовленный на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) 4% параформальдегид, который из всего класса диафораз сохраняет активность только NADPH-диафоразы. Материал фиксировали в течение 2 часов при температуре 4°С, сутки промывали при той же температуре в 15% растворе сахарозы, 7-8 раз меняя раствор. Из образцов ткани, замороженных в криостате, изготавливали срезы толщиной 10 мкм, монтировали на предметные стекла и помещали в инкубационную среду. Состав и конечная концентрация среды были следующими: 50 мМ Трис-буфер (рН 8,0), 1 мМ NADPH («Sigma»), 0,5 мМ нитросинего тетразолия («Sigma») и 0,2% Тритон Х-100 («Serva»). Инкубацию проводили в течение 60 минут в термостате при температуре 37°С. Затем срезы ополаскивали в дистиллированной воде, обезвоживали и заключали в бальзам по общепринятой в гистологии методике.

Измерение активности фермента производили в эндотелии и гладких миоцитах аорты, бедренных артериях и микрососудах ПБС крыс.

Активность фермента определяли при помощи программы "ImageJ1.37 v" и выражали в единицах оптической плотности. Имеются доказательства прямой зависимости между концентрацией исследуемого фермента и оптической плотностью преципитата, образующегося в результате гистохимической реакции .

Для математической обработки полученных данных использовали программу SPSS v. 16. Сравнение средних значений в выборках осуществляли с помощью непараметрического U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.

Мониторинг артериального давления показал, что во II экспериментальной группе (Д+АГ) артериальное давление было выше, чем в I группе и в группе здоровых крыс на протяжении всего эксперимента (2, 4, 6 месяцев), что подтверждает формирование реноваскулярного и ренопривного механизмов артериальной гипертензии (таблица 1).

При исследовании липидного спектра в опытных группах крыс через 2 месяца эксперимента установлено увеличение уровня ОХ, ТГ, ЛПНП, ЛПВП и КА, по сравнению с контрольной группой (р u <0,05) (таблица 2). При этом в группе крыс с артериальной гипертензией значения ОХ, ЛПНП, ЛПВП и КА были достоверно выше (р u <0,05), а уровень ТГ - несколько ниже (p u >0.05), чем в группе крыс с изолированной гиперлипидемией (таблица 2). На 4 месяце эксперимента в I группе крыс сохранялись нарушения липидного профиля, достоверно повышался уровень ЛПНП (р u <0,05). Во II группе значения ЛПВП и ЛПНП снизились и стали ниже, чем в I группе животных, при этом происходило увеличение уровня ТГ и КА. К 6 месяцу эксперимента в обеих опытных группах животных достоверно нарастал уровень ОХ и ТГ. У крыс с атерогенной диетой к этому периоду эксперимента отмечалось увеличение содержания липопротеинов высокой плотности по сравнению с их уровнем на 4 месяце исследования, при этом значения ЛПНП и КА не повышались (р u <0,05), тогда как во II группе крыс (Д+АГ) продолжалась тенденция снижения показателей ЛПНП и ЛПВП. При этом уровень ЛПВП у крыс данной группы стал ниже, чем у здоровых крыс (р u <0,05), произошло увеличение КА - в 2,5 раза по сравнению с I группой и в 4,8 раза по сравнению с контрольной группой крыс (таблица 2). Выявленные изменения подтверждают более выраженные нарушения липидного спектра у крыс II группы (Д+АГ). Снижение сывороточного содержания ЛПНП и ЛПВП у крыс с артериальной гипертензией и гиперлипидемией, вероятно, указывает на усиление их рецепции эндотелием сосудов.

При оценке NADPH-диафоразы сосудов установлено, что в бедренных артериях I опытной и контрольной группы животных содержание NADPH-диафоразы было ниже, чем в аорте, что можно объяснить анатомическими особенностями строения стенок данных сосудов (в бедренных артериях более выражен мышечный компонент) (р u <0,05). В бедренных артериях II группы крыс значения NADPH-диафоразы были несколько ниже, чем в аорте, однако показатели не имели достоверной разницы, что может свидетельствовать о более выраженном нарушении синтеза этого кофермента в аорте при моделировании реноваскулярной гиперетензии. При мониторинге NADPH-диафоразы зарегистрировано снижение ее уровня во фрагментах аорты и бедренных артерий I и II опытных групп крыс с достоверностью различий с контролем (р u <0,05) (табл.3).

Не установлено достоверных различий в содержании кофермента сосудов в зависимости от времени проведения эксперимента (2, 4, 6 месяцев) во всех экспериментальных группах. Наибольшее снижение уровня NADPH-диафоразы определялось на 2 месяце исследования с относительной стабилизацией значений кофермента на низком уровне при последующем мониторинге.

У крыс с гиперлипидемией и артериальной гипертензии значение NADPH-диафоразы в динамике всего эксперимента было ниже, чем в прототипе (p u <0,05), что свидетельствует о более глубоком нарушении функциональных свойств эндотелия. У крыс II группы уровень NADPH-диафоразы в сосудах микроциркуляторного русла снижался ко 2 месяцу исследования, тогда как в группе крыс I группы (ЭГ) достоверное снижение его уровня происходило только к 6 месяцу эксперимента.

При мониторинге состояния артериального русла методом магниторезонансной томографии (МРТ) установлено, что на 2 месяце исследования у опытных крыс ширина общей сонной артерии, плечеголовного ствола и грудной части аорты увеличивалась (таблица 4, фиг.1, фиг.2). Данная сосудистая реакция, обусловлена включением защитно-приспособительных механизмов для поддержания центральной гемодинамики.

Однако к 6 месяцу эксперимента отмечалось сужение просвета перечисленных сосудов (таблица 4), наиболее выраженное во II группе крыс (достоверность различий с I группой (р u <0,05). У крыс II группы регистрировалось уменьшение ширины просвета подвздошных артерий, что свидетельствует о мультифокальности поражения артериального русла при комплексном действии гиперлипидемии и артериальной гипертензии. Определялось неравномерное контрастирование артерий в моделе Д+АГ, что предполагает локальные атерогенные изменения стенки артерий (фиг.2).

Оценка гистологической структуры артериальной стенки показала, что наиболее выраженные изменения сосудов регистрируются к 6 месяцу эксперимента. В аорте и бедренных артериях опытных крыс при окраске гематоксилином и эозином наблюдаются изменения архитектоники эластических волокон, визуализируются перинуклеарные оптически пустые образования, смещение ядер миоцитов на периферию, их уплотнение, клеточная инфильтрация стенки, утолщение эндотелия (фиг.3, фиг.4, фиг.6,) по сравнению с интактными крысами (фиг.5, фиг.7). При этом наиболее выраженные изменения морфологии артерий регистрируются во второй экспериментальной группе (Д+АГ) (фиг.4, фиг.6). При окраске артерий Суданом 4 по методу Окамото у опытных крыс с Д+АГ выявлена инфильтрация сосуда жировыми включениями. При этом отложение жира заполняют пустоты, выявленные при окраске гематоксилином и эозином (фиг.8, фиг.9).

В ПБС у опытных крыс наблюдается уменьшение числа микрососудов (в I группе крыс выявляются 5-7 микрососудов, во II группе - 3-4 микрососуда в поле зрения, тогда как у контрольных крыс - 8-10 микрососудов). Сосуды микроциркуляторного русла у крыс II экспериментальной группы в виде штрихов с пролиферацией эндотелиоцитов, тогда как у контрольных крыс - овальной или округлой формы. Увеличивалась толщина микрососудов передней брюшной стенки в опытных группах крыс. При этом максимальное утолщение стенки микрососудов наблюдалось во II экспериментальной группе (М=4,62 (4,36-4,72) мкм во второй группе, М=2,31 (2,12-2,36) мкм в I группе, и 1,54 (1,50-1,62) мкм - у контрольных крыс). Зарегистрировано увеличение толщины стенки аорты и бедренных артерий у опытных крыс. У крыс с артериальной гипертензии регистрировалось увеличение толщины стенки и интимы сосудов, по сравнению с моделью изолированной экспериментальной гиперлипидемии (фиг.10).

Сопоставительный анализ заявляемого решения с прототипом показывает, что в заявляемом способе, сочетающем артериальную гипертензию и гиперлипидемию к 6 месяцу эксперимента установлены изменения липидного спектра сыворотки крови (повышение уровня OX, ТГ, снижение ЛПВП, увеличение КА) по сравнению с прототипом. Заявляемый способ позволяет установить стойкое увеличение систолического и диастолического артериального давления со 2 по 6 месяц исследования. По сравнению с прототипом зарегистрировано снижение активности NADPH-диафоразы в эндотелии сосудов к 6 месяцу эксперимента. Наблюдалось повреждение сосудов: деформация эластических волокон, увеличение толщины стенки и интимы, клеточная инфильтрация, отложение жировых включений в стенке, сужение просвета сосудов, уменьшение количества микрососудов ПБС.

Способ моделирования атеросклероза, включающий кормление исследуемых животных атерогенным рационом, состоящий из добавления в корм порошка холестерина в количестве 1%, маргарина 10%, мерказолила 10 мг/кг и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крысы, отличающийся тем, что наряду с кормлением атерогенным рационом животным проводят операцию, состоящую из наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивания верхнего полюса правой почки, при этом оставляя 2/3 органа.

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции дефицита оксида азота. Для этого в эксперименте моделируют дефицит оксида азота ежедневным, в течение 7 дней, внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования первичного билиарного цирроза. Для этого в просвет бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки и терминальный отдел подвздошной кишки крысы вводят по 0,08-0,12 мл 45-50% спиртового раствора пикрилсульфоновой кислоты с интервалом 5-10 минут.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано при моделировании хронической гнойной костной раны. Формирование костного дефекта проводят вдоль оси кости, помещают в него смесь культуры музейного штамма Staphylococcus Aureus №5 в количестве 40-45 млн KОЕ на 1 кг массы тела экспериментального животного и 0,1 мл стерильного кварцевого песка.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к офтальмологии, и касается моделирования диабетического макулярного отека. Для этого крысе вводят аллоксан в брюшную полость в дозе 15,0 мг/100 г веса.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине. Лабораторным животным через 9 недель после прекращения воздействия токсиканта проводят стимуляционную миографию.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого моделируют ишемию мышц голени, в том числе при одновременном дополнительном моделировании дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением в течение 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования энцефалопатии в пренатальном периоде развития животного. Для этого самкам мелких лабораторных животных ежедневно подкожно вводят раствор нитрита натрия в дозе 50 мг/кг с 10-го по 19-й день беременности.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения фармакологического обеспечения выживаемости кожного лоскута в условиях редуцированного кровообращения.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для изучения возможности коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной стоматологии, и касается моделирования деминерализации эмали зуба. Для этого на удаленный зуб фиксируют брекет. Ограничивают очаг, который расположен на вестибулярной поверхности зуба вокруг брекета, восковым покрытием. Погружают зуб в индивидуальную емкость с деминерализирующим гелем, состоящим из (вес.%): дигидрофосфата кальция - 0.04-0.08, молочной кислоты - 0.8-1.0, праестола 2510 - 3.0-4.5, раствора гидроксида натрия - 0.4, дистиллированной воды - остальное. Затем емкость с зубом помещают в термостат при pH=4.5 на 96 часов. Способ обеспечивает повышение четкости очага деминерализации. 4 ил., 2 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и предназначено для изучения принадлежности изучаемых лекарственных препаратов к субстратам эффлюксного белка-транспортера Pgp (гликопротеина-Р). Для этого моделируют в эксперименте состояние индукции функциональной активности этого белка. В качестве препарата-индуктора используют финастерид. Препарат вводят кроликам внутрижелудочно в форме суспензии в оливковом масле в суточной дозе 0,225 мг/кг массы тела животного в течение 14 дней. Способ обеспечивает создание модели, являясь безопасным, не требующим дорогостоящего лабораторного спецоборудования и материалов. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаза. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 10000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока начиная с 7 суток после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва. 1 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаз. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока на 21 сутки после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения изолированного неврита зрительного нерва. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к регенеративной медицине и тканевой инженерии, и может быть использовано для получения экстрацеллюлярных матриксов кровеносных сосудов малого калибра. Для этого на первом этапе тканей фрагмент кровеносного сосуда отмывают дистиллированной водой в течение 1 часа при температуре +4°С. Затем фрагмент помещают в 0,05% раствор трипсина и 0,02%-ной ЭДТА на 1 час при температуре +37°С. На третьем этапе проводят обработку в 0,075% растворе додецилсульфата натрия в течение 24 часов при температуре 26°С. Далее фрагмент помещают в 0,25%-ный раствор Тритон Х-100 на 24 часа при температуре 26°С. На четвертом этапе данный фрагмент обрабатывают раствором, содержащим РНКазу А 20 мкг/мл и ДНКазу I 200 мкг/мл, в течение 6 часов при температуре +37°С. При этом после каждого этапа обработки фрагмент кровеносного сосуда трижды промывают в фосфатно-солевом буферном растворе по 10 минут. Весь процесс обработки осуществляют при постоянном перемешивании растворов и одновременной вибрации, создаваемой вибромотором, который расположен на наружной стенке емкости. Способ позволяет повысить качество децеллюляризации кровеносных сосудов малого калибра, сохранить их целостность и ультраструктуру для последующей иммобилизации клеток реципиента. 2 пр., 6 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной офтальмологии, и касается моделирования диабетической макулярной неоваскуляризации. У крыс моделируют сахарный диабет путем интрабрюшинного введения аллоксана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель в стекловидное тело по методике интравитреального доступа вводят крысиный VEGF 164 на 1-е, 3-и и 7-е сутки по 1 мкг, в суммарной дозе 3 мкг. Способ обеспечивает неоваскуляризацию макулярной области, типичную для сахарного диабета, что позволяет в дальнейшем изучать эффективность и определять целесообразность проводимой терапии этого заболевания. 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования мелкоочаговых мозговых геморрагий у новорожденных крыс. Для этого новорожденных крыс в возрасте 3-х дней помещают в камеру и подвергают воздействию звука силой 70 дБ, частотой 110 Гц, на протяжении 60 минут. Способ обеспечивает развитие мелкоочаговых мозговых геморрагий в коре головного мозга у 100% новорожденных крыс, без разрыва крупных сосудов, что наиболее близко соответствует клинической картине мозговых геморрагий у новорожденных детей. 7 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Для выявления психотропных свойств изучаемых веществ осуществляют моделирование эмоционально-физической стрессовой ситуации, достигаемой помещением животных в цилиндр с холодной водой. Регистрируют время решения и выполнения задачи покинуть цилиндр при помощи предлагаемых средств спасения (рейка, лестница и веревка), установленных в цилиндре. Рассчитывают процентную вероятность решения задачи. Осуществляют расчет индексов, характеризующих психоэмоциональное и моторно-двигательное воздействие изучаемого вещества по определенным математическим формулам. Способ является технически простым, финансово низкозатратным, имеет высокий уровень воспроизводимости, позволяет с низкими затратами времени и высокой долей вероятности определить психоседативное или психостимулирующее действие изучаемого вещества.1 ил., 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии, и может быть использовано для изучения вопросов патогенеза нефрогенной артериальной гипертензии и для скрининговых и детальных фармакологических исследований. Для моделирования ренопаренхиматозной артериальной гипертензии взрослым крысам-самцам массой производят химическое повреждение паренхимы почек путем введения 0,1 мл 4% параформальдегида в верхний полюс обеих почек. Способ обеспечивает в короткие сроки получение стойкого повышения артериального давления, высокую воспроизводимость результата, простоту выполнения процедуры, ее малую инвазивность, короткий реабилитационный период при формировании значимых морфологических и биохимических перестроек в органах-мишенях, аналогичных клиническим вариантам ренопаренхиматозной артериальной гипертензии. 2 табл., 4 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения механизмов коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней с 14 дня беременности внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. После этого проводят однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности на 21 день беременности путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией. Через 90 минут проводят сосудистые пробы с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции. Способ позволяет изучать NO - не обусловленные механизмы защитного эффекта при коррекции эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии и касается моделирования атеросклероза, что может быть использовано для изучения диагностики, профилактики и лечения этого заболевания. Для этого лабораторным животным - крысам добавляют в корм порошок холестерина в количестве 1, маргарин 10, мерказолил 10 мгкг и витамин D - 2,5 ME на кг массы тела. Дополнительно животным проводят операцию, состоящую из наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивания верхнего полюса правой почки, оставляя 23 органа. Способ легко выполним, не вызывает гибели животных, является адекватной моделью повреждения эндотелия и развития атеросклеротического процесса. 12 ил., 4 табл., 1 пр.

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Тема: Экспериментальный атеросклероз

1. Вступление: Экспериментальный атеросклероз

2. Поражения сосудов, развивающиеся при нарушениях питания

3. Изменения аорты при гипервитаминозе D

4. Некрозы и аневризмы аорты у крыс

5. Некротический артериит

6. Изменения сосудов при недостаточном количестве белка в пище

7. Дистрофически-склеротические изменения сосудов, получаемые с помощью некоторых химических веществ

8. Аортиты, получаемые путем механического термического и инфекционного поражения сосудистой стенки

Литература

ВСТУПЛЕНИЕ: ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ АТЕРОСКЛЕРОЗ

Экспериментальное воспроизведение изменений сосудов, сходных с атеросклерозом человека, достигается путем кормления животных пищей, богатой холестерином или чистым холестерином, растворенным в растительном масле. В разработке экспериментальной модели атеросклероза наибольшее значение имели исследования русских авторов.

В 1908 г. А.И. Игнатовский впервые установил, что при кормлении кроликов животной пищей в аорте развиваются изменения, весьма напоминающие атеросклероз человека. В том же году А.И. Игнатовский совместно с Л.Т. Мооро создал классическую модель атеросклероза, показав, что при кормлении кроликов яичным желтком в течение 1у2--61/2 месяцев развивается атероматоз аорты, который, начинаясь в интиме, переходит на среднюю оболочку. Эти данные были подтверждены Л.М. Старокадомским (1909) и Н.В. Стуккеем (1910). Н.В. Веселкиным, С.С. Халатовым и Н. П. Аничковым было выяснено, что главной действующей частью желтков является холестерин (А.И. Моисеев, 1925). После этого для получения атеросклероза наряду с желтками стали использовать чистый холестерин ОН. И. Аничков и С.С Халатов, 1913).

Для получения атеросклеротических изменений в аорте и крупных сосудах взрослых кроликов кормят ежедневно в течение 3--4 месяцев холестерином, растворенным в подсолнечном масле. Холестерин растворяют в нагретом подсолнечном масле так, чтобы получился 5--10% раствор, который вводят в желудок подогретым до 35--40°; ежедневно животное получает 0,2--0,3 г холестерина на 1 кг веса. Если точной дозировки холестерина не требуется, его дают смешанным с овощами. Уже через 1,5--2 недели у животных развивается гиперхолестеринемия, достигающая постепенно очень высоких цифр (до 2000 мг% при норме в 150 мг%). В аорте, по данным Н. Н. Аничкова (1947), развертываются следующие изменения. На внутренней поверхности сосуда через 3--4 недели после начала опыта появляются пятнышки и полоски овальной формы, несколько возвышенные. Постепенно (к 60--70 дню) образуются довольно крупные бляшки, вдающиеся в просвет сосуда. Они появляются прежде всего в начальной части аорты над клапанами и в дуге у устий крупных шейных артерий; в дальнейшем эти изменения распространяются по аорте в каудальном направлении (рис. 14). Количество и размеры бляшек

увеличиваются, они сливаются между собой с образованием сплошных диффузных утолщений стенки аорты. Такие же бляшки образуются на клапанах левого сердца, в венечных, сонных и в легочной артериях. Наблюдается отложение липоидов и в стенках центральных артерий селезенки и в мелких артериях печени.

Т.А. Синицына (1953) для получения атеросклероза главных ветвей коронарных артерий сердца кормила кроликов в течение длительного времени яичными желтками (0,2 -- 0,4 г холестерина), разболтанными в молоке, и одновременно вводила им 0,3 г тиоурацила. Каждый кролик за время опыта получил 170--200 желтков. При микроскопическом исследовании в ранней стадии обнаруживается диффузное скопление липоидов в межуточном веществе стенки аорты, особенно между внутренней эластической пластинкой п эндотелием. В дальнейшем появляются крупные клетки (полибласты и макрофаги), накопляющие липоидные вещества в виде двоякопреломляющих капель холестеринзетеров. Одновременно в местах отложения липоидов в большом количестве образуются эластические волокна, отщепляющиеся от внутренней эластической пластинки и располагающиеся между клетками, содержащими липоиды. Вскоре в этих местах появляются сначала прсколлагеновые, а потом коллагеновые волокна (Н.Н. Аничков, 1947).

В исследованиях, выполненных под руководством Н. Н. Аничкова, был изучен также процесс обратного развития описанных выше изменений. Если после 3--4-месячного кормления животных холестерином прекратить его введение, то происходит постепенное рассасывание липоидов из бляшек, которое у кроликов продолжается свыше двух лет. На местах крупных липоидиых скоплений образуются фиброзные бляшки, с остатками липоидов и кристаллами холестерина в центре. Поллак (1947) и Фистбрук (1950) указывают, что с увеличением веса животных степень выраженности экспериментального атеросклероза возрастает.

Длительное время кролики оставались единственным видом животных, используемым для получения экспериментального атеросклероза. Это объясняется тем, что, например, у собак при кормлении даже большими количествами холестерина уровень последнего в крови поднимается незначительно и атеросклероз не развивается. Однако Стейнер и др. (1949) показали, что, если сочетать кормление собак холестерином с понижением функции щитовидной железы, возникает значительная гиперхолестеринемия и развивается атеросклероз. Собакам ежедневно в течение 4 месяцев с пищей вводился тиоурацил в возрастающих количествах: в течение первых двух месяцев по 0,8 г, в течение третьего месяца -- по 1 г, а в дальнейшем по 1,2 г. Одновременно собаки получали ежедневно с пищей по 10 г холестерина, который предварительно растворялся в эфире и смешивался с пищей; корм давался собакам после испарения эфира. Контрольные опыты показали, что длительное введение собакам одного тиоурацила или холестерина не вызывает ни значительной гиперхолестеринемии (4-00 мг% при норме в 200 мг%), ни атеросклероза. В то же время при одновременной даче собакам тиоурацила и холестерина развиваются выраженная гиперхолестеринемия (до 1200 мг%) и атеросклероз.

Топография атеросклероза у собак в значительно большей степени, чем у кроликов, напоминает атеросклероз человека: наиболее выражены изменения в брюшной аорте, наблюдается значительный атеросклероз крупных ветвей венечных артерий сердца со значительным сужением просвета сосуда (рис. 15), множество бляшек заметно в артериях головного мозга. Хьюпер (1946) вводил собакам ежедневно в яремную вену 50 мл раствора гидроксилцеллюлозы различной вязкости (в 5--6 раз превышающей вязкость плазмы) и наблюдал развитие в аорте атероматоза и дистрофических изменений средней оболочки. При оценке степени выраженности экспериментального атеросклероза следует учитывать указания Линдсея и др. (1952, 1955), которые установили, что у старых собак и кошек нередко имеет место значительный артериосклероз. Отложения липоидов обычно бывают незначительны, причем холестерин в них не обнаруживается.

Брегдон и Бойл (1952) получили атеросклероз у крыс путем внутривенных инъекций липопротеипов, полученных из сыворотки кроликов, накормленных холестерином. Эти лнпопротеины выделялись, очищались и концентрировались иентрифугированием при 30 тысячах оборотов в минуту с повышенной концентрацией соли в сыворотке до 1063. Избыток соли затем удалялся диализом. При ежедневных пов торных инъекциях у крыс появляются значительные отложения липоидов в стенке аорты и крупных сосудов. Чайков, Линдсей, Лоренц (1948), Линдсей, Никольс и Чайков (1.955) получили атеросклероз у птиц, периодически вводя им подкожно по 1--2 таблетки диэтилстилбестрола (каждая из таблеток содержала 12--25 мг препарата); опыт продолжался в течение 10 месяцев.

Развивающийся при этом атеросклероз по топографии и морфогенезу не отличался от холестеринового. По данным этих авторов, атеросклероз у птиц может быть получен и обычным способом -- кормлением холестерином.

Воспроизведение атеросклероза у обезьян нередко заканчивалось неудачей (Кавамура, цит. по Манну и др., 1953). Однако Манну и др. (1953) удалось получить у человскообразных обезьян выраженный атеросклероз аорты, сонных и бедренных артерий при кормлении их в течение 18--30 месяцев пищей, богатой холестерином, но содержащей недостаточное количество метионина или цистина. Ежедневное добавление к пище 1 г метионина предотвращает развитие атеросклероза. Ранее Райнхэрт и Гринберг (1949) получили атеросклероз у обезьян при содержании их в течение 6 месяцев па диете с повышенным количеством холестерина и недостаточным -- пиридоксина.

Развитие экспериментального атеросклероза может быть ускорено или, наоборот, замедлено. Ряд исследователей наблюдал более интенсивное развитие атеросклероза при сочетании кормления животных холестерином с экспериментальной гипертонией. Так, Н.Н. Аничков (1914) показал, что при сужении просвета брюшной аорты на V»--2/з развитие атеросклероза у кроликов, получающих ежедневно 0,4 г холестерина, значительно ускоряется. По данным Н.И. Аничкова, более интенсивные атеросклеротические изменения можно получить у животных при кормлении их холестерином и ежедневных внутривенных инъекциях раствора 1: 1000 адреналина в количестве 0,1--0,15 мл в течение 22 дней. Уиленс (1943) давал кроликам ежедневно по 1 г холестерина (6 дней в неделю) и помещал их в вертикальное положение на 5 часов (также 6 раз в неделю), что приводило к повышению кровяного давления на 30--40%. Опыт продолжался от 4 до 12 недель; у этих животных атеросклероз был выражен значительно сильнее, чем у контрольных (которых только кормили холестерином или помещали в вертикальное положение).

В.С. Смоленский (1952) наблюдал более интенсивное развитие атеросклероза у кроликов с экспериментальной гипертонией (сужение брюшной аорты; обертывание одной почки резиновой капсулой и удаление другой).

Естер, Дэвис и Фридман (1955) наблюдали ускорение развития атеросклероза у животных при кормлении их холестерином в сочетании с повторными инъекциями эпинефри-на. Кроликам ежедневно вводили эпинефрин внутривенно из расчета 25 мг на 1 кг веса. Эта доза через 3--4 дня увеличивалась до 50 мг на 1 кг веса. Инъекции продолжались 15 -- 20 дней. В течение этого же срока животные получали 0,6--0,7 г холестерина. У подопытных животных обнаруживались более значительные отложения липоидов в аорте, по сравнению с контрольными кроликами, которые получали только холестерин.

Шмидтман (1932) показала значение повышенной функциональной нагрузки на сердце для развития атеросклероза венечных артерий. Крысы получали ежедневно с пищей 0,2 г холестерина, растворенного в растительном масле. Одновременнo животных заставляли ежедневно бегать в третбане. Опыт продолжался в течение 8 месяцев. Контрольные крысы получали холестерин, но в барабане не бегали. У подопытных животных сердце было примерно в 2 раза больше, чем у контрольных (главным образом, за счет гипертрофии стенки левого желудочка); у них особенно резко был выражен атеросклероз венечных артерий: местами просвет сосуда был почти полностью закрыт атеросклеротической бляшкой. Степень развития атеросклероза в аорте у подопытных и контрольных животных была примерно одинаковой.

К.К. Маслова (1956) установила, что при кормлении кроликов холестерином (0,2 мг ежедневно в течение 115 дней) в сочетании с внутривенными введениями никотина (0,2 мл, 1 % раствора ежедневно) отложение липоидов в стенке аорты происходит в значительно большей степени, чем в тех случаях, когда кролики получают только холестерин. Это явление К. К. Маслова объясняет тем, что дистрофические изменения сосудов, вызываемые никотином, способствуют более интенсивному накоплению липоидов в их стенке. Келли, Тейлор и Хусс (1952), Приор и Хартмап (1956) указывают, что в участках дистрофических изменений стенки аорты (механическое повреждение, кратковременное замораживание) атеросклеротические изменения бывают особенно резко выражены. Вместе с тем, отложение липоидов в этих местах задерживает и извращает течение восстановительных процессов в стенке сосуда.

В ряде исследований было показано задерживающее влияние некоторых веществ на развитие экспериментального атеросклероза. Так, при кормлении кроликов холестерином и одновременной даче им тиреоидина, развитие атеросклероза происходит значительно медленнее. В. В. Татарский и В.Д. Циперлинг (1950) установили, что тиреоидин способствует и более быстрому обратному развитию атероматозных бляшек. Кроликам ежедневно через зонд вводили в желудок 0,5 г холестерина (0,5% раствор в подсолнечном масле). После 3,5 месяцев кормления холестерином начинали применять тиреоидин: ежедневное введение в желудок через зонд 0,2 г тиреоидина в виде водной эмульсии в течение 1,5--3 месяцев. У этих кроликов в отличие от контрольных (которым тиреоидин не вводился) имело место более крутое падение гиперхолестеринемии и более выраженное обратное развитие атероматозных бляшек (меньшее количество липоидов в стенке аорты, отложенце их преимущественно в виде крупных капель). Задерживающее влияние на развитие атеросклероза оказывает также холин.

Стейнер (1938) давал кроликам в течение 3--4 месяцев 3 раза в неделю с пищей по 1 г холестерина. Кроме того, животным, ежедневно вводилось 0,5 г холина в виде водной эмульсии. Оказалось, что холии заметно задерживает развитие атеросклероза. Было показано также, что под влиянием холина происходит более быстрое обратное развитие атероматозных бляшек (введение кроликам холина в течение 60 дней после предварительного 110-дневного кормления их холестерином). Данные Стейпера были подтверждены Бауманом и Рашем (1938), Моррисопом и Роси (1948). Хорлик и Дафф (1954) установили, что развитие атеросклероза значительно задерживается под влиянием гепарина. Кролики в течение 12 недель ежедневно с пищей получали 1 г холестерина. Одновременно животным ежедневно делались внутримышечные инъекции 50 мг гепарина. У леченных кроликов атеросклероз был выражен значительно слабее, чем у контрольных, не получавших гепарина. Аналогичные результаты ранее были получены Констенидесом и др. (1953). Стампф и Уиленс (1954), Гордон, Коберник и Гарднер (1954) обнаружили, что кортизон задерживает развитие атеросклероза у кроликов, получающих холестерин.

Дафф и Мак Миллэп (1949) показали, что у кроликов с аллоксановым диабетом значительно задерживается развитие экспериментального атеросклероза. Кроликам внутривенно вводили 5% водный раствор аллоксипа (из расчета 200 мг па 1 кг веса). Спустя 3--4 недели (когда развивалась картина диабета), животным давали в течение 60--90 дней холестерин (всего они получали 45--65 г холестерина). У этих животных, по сравнению с контрольными (без диабета), атеросклероз был выражен значительно слабее. Некоторые исследователи наблюдали резкое замедление развития атеросклероза у кроликов, которые одновременно с получением холестерина подвергались общему облучению ультрафиолетовыми лучами. У этих животных содержание холестерина в сыворотке повышалось незначительно.

Существенное влияние на развитие атеросклероза оказывают некоторые витамины. Показано (А.Л. Мясников, 1950; Г.И. Лейбман и Э. М. Берковский, 1951), что под влиянием аскорбиновой кислоты развитие атеросклероза задерживается. Г.И. Лейбман и Э.М. Берковский давали кроликам ежедневно в течение 3 месяцев по 0,2 г холестерина на 1 кг веса. Одновременно животные получали ежедневно аскорбиновую кислоту (0,1 г па 1 кг веса). У этих животных атеросклероз был выражен слабее, чем у тех, которые не получали аскорбиновой кислоты. У кроликов, получающих холестерин (ежедневно 0,2 г. в течение 3--4 месяцев) в сочетании с витамином Д (по 10 000 ед. ежедневно в течение всего опыта), развитие атеро-склеротических изменений усиливается и ускоряется (А.Л. Мясников, 1950).

По данным Браджера (1945), витамин Е способствует более интенсивному развитию экспериментального холестеринового атеросклероза: кроликам 3 раза в неделю в течение 12 недель С нищей давался 1 г холестерина; одновременно делались внутримышечные инъекции 100 мг витамина Е. У всех живот-НІ1ІХ имела место более высокая гиперхолестеринемия и более НЫрижеппый атеросклероз, по сравнению с кроликами, не получившими витамина Е.

ПОРАЖЕНИЯ СОСУДОВ, РАЗВИВАЮЩИЕСЯ ПРИ НАРУШЕНИЯХ ПИТАНИЯ. ИЗМЕНЕНИЯ АОРТЫ ПРИ ГИПЕРВИТАМИНОЗЕ Д

Под влиянием больших доз витамина Д у животных развиваются выраженные изменения внутренних органов и крупных сосудов. Крейтмайр и Хинтцельман (1928) наблюдали значительные отложения извести в средней оболочке, аорты у кошек, которым в течение месяца ежедневно с пищей давали 28 мг облученного эргостерола (рис. 16). Некротические изменения средней оболочки аорты с последующей кальцифп-кацией обнаружил у крыс Дагайд (1930), который ежедневно давал животным 10 мг облученного эргостерола в 1% растворе па оливковом масле. Меессен (1952) для получения некрозов средней оболочки аорты давал кроликам в течение трех недель 5000 сд. витамина Дг. При этих условиях имели место лишь микроскопические изменения. Джилмэн и Джилберт (1956) обнаружили дистрофию средней оболочкн аорты у крыс, которым в течение 5 дней давали по 100.000 ед. витамина Д на 1 кг веса. Поражение сосудов было более интенсивным у животных, которым перед введением витамина Д в течение 21 дня давалось по 40 мкг тироксина.

НЕКРОЗЫ И АНЕВРИЗМЫ АОРТЫ У КРЫС

При длительном кормлении крыс пищей, содержащей большое количество гороха, развиваются дистрофические изменения стенки аорты с постепенным образованием аневризмы. Бечхьюбур и Лэлич (1952) давали белым крысам корм, 50% которого составлял размолотый или грубый, необработанный горох. Кроме гороха в диету входили дрожжи, казеин, оливковое масло, солевая смесь и витамины. Животные находились на диете от 27 до 101 дня. У 20 из 28 подопытных крыс развилась аневризма аорты в области дуги ее. У некоторых животных произошел разрыв аневризмы с образованием массивного гемоторакса. При гистологическом исследовании обнаруживался отек средней оболочки аорты, разрушение эластических волокон и мелкие кровоизлияния. В дальнейшем развивался фиброз стенки с образованием аневризматического расширения сосуда. Пансети и Бэард (1952) в аналогичных экспериментах наблюдали развитие аневризмы в грудном отделе аорты у 6 из 8 подопытных крыс. Наряду с этим у животных развился кифосколиоз, возникший в результате дистрофических изменений в телах позвонков. Пять животных на 5--9 неделе погибли от разрыва аневризмы и массивного гемоторакса.

Уолтер и Виртшафтср (1956) содержали молодых крыс (с 21 дня после рождения) на диете, 50% которой составлял горох; кроме того, в диету входили: маис, казеин, молочный порошок соли, витамины. Все это смешивалось и давалось животным. Последних убивали через 6 недель после начала опыта. В отличие от цитированных выше экспериментов, в этих опытах наблюдалось поражение порты не только в области дуги, но и в других отделах, в Том числе в брюшном. Гистологически изменения сосудов совершались в двух, параллельно развивающихся процессах: дистрофии и распаде эластического каркаса, с одной стороны, и ршнштпя фиброза -- с другой. Обычно наблюдались множественные внутристеночные гематомы. Существенные изменения имели место также в легочной артерии и венечных артериях сердца. Некоторые крысы погибли вследствие разрыва аневризмы; в ряде случаев последняя имела характер расслаивающей. Лулич (1956) показал, что описанные изменения аорты обусловлены содержащимся в горохе Р-амипопропиопитритом.

НЕКРОТИЧЕСКИЙ АРТЕРИИТ

Холман (1943, 1946) показал, что у собак, содержащихся па диете, богатой жиром, почечная недостаточность приводит к развитию некротического артериита. Животным давали пищу, в которой 32 части составляла говяжья печень, 25 частей - тростниковый сахар, 25 частей -- крахмальные зерна, 12 частей -- масло, 6 частей -- рыбий жир; к этой смеси добавлялся каолин, соли и томатный сок. Опыт продолжался 7--8 недель (время, необходимое для возникновения сосудистых поражений при наличии почечной недостаточности). Почечная недостаточность достигалась различными способами: двусторонней нефрэктомией, подкожными инъекциями 0,5% водного раствора нитрата урана из расчета 5 мг на 1 кг веса животного или внутривенными введениями 1 % водного раствора хлористой ртути из расчета 3 мг на 1 кг веса животного. У 87% подопытных животных развился некротический артериит. В сердце наблюдался выраженный пристеночный эндокардит. Некротический артериит развивался только при сочетании кормления животных пищей, богатой жиром, с почечной недостаточностью. Каждый из этих факторов в отдельности существенных поражений стенок сосудов не вызывал.

ИЗМЕНЕНИЯ СОСУДОВ, ВОЗНИКАЮЩИЕ ПРИ НЕДОСТАТОЧНОМ КОЛИЧЕСТВЕ БЕЛКА В ПИЩЕ

Ханмап (1951) давал белым мышам пищу следующего состава (в процентах): сахарозы -- 86,5, казеина -- 4, солевой смеси -- 4, растительного масла -- 3, рыбьего жира -- 2, цистина -- 0,5; безводной смеси глюкозы -- 0,25 (0,25 г этой смеси содержали 1 мг рибофлавина), парааминобепзойной кислоты -- 0,1, инозитола -- 0,1. К 100 г диеты добавлялось 3 мг пантотената кальция, 1 мг никотиновой кислоты, 0,5 мг солянокислого тиамина и 0,5 мг солянокислого пиридоксина. Мыши погибали в течение 4--10 недель. Наблюдалось поражение аорты, легочной артерии и сосудов сердца, печени, поджелудочной железы, легких и селезенки. В ранней стадии в интиме сосудов появлялось базофильиое, гомогенное вещество, образующее несколько выступающие под эндотелием бляшки:, имели место очаговые повреждения средней оболочки с разрушением эластических волокон. Процесс заканчивался развитием артериосклероза с отложением извести в участках дистрофии.

ДИСТРОФИЧЕСКИ-СКЛЕРОТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ СОСУДОВ, ПОЛУЧАЕМЫЕ С ПОМОЩЬЮ НЕКОТОРЫХ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ

(адреналин, никотин, тирамин, дифтерийный токсин, нитраты, высокомолекулярные белки)

Жозюэ (1903) показал, что после 16--20 внутривенных инъекций адреналина у кроликов развиваются значительные дистрофические изменения преимущественно в средней оболочке аорты, заканчивающиеся склерозом и в отдельных случаях -- аневризматическим расширением. Это наблюдение в дальнейшем было подтверждено многими исследователями. Эрб (1905) вводил кроликам в вену уха каждые 2--3 дня по 0,1--0,3 мг адреналина в 1% растворе; инъекции продолжались в течение нескольких недель и даже месяцев. Рженховский (1904) вводил кроликам внутривенно по 3 капли раствора адреналина 1: 1000; инъекции производились ежедневно, иногда с промежутками в 2--3 дня в течение 1,5-- 3 месяцев. Б. Д. Ивановский (1937) для получения адреналинового склероза вводил кроликам внутривенно ежедневно или через день раствор адреналина I: 20000 в количестве от 1 до 2 мл. Кролики получали до 98 инъекций. В результате длительных инъекций адреналина закономерно развиваются склеротические изменения в аорте и крупных сосудах. Поражается, главным образом, средняя оболочка, где развиваются очаговые некрозы с последующим развитием фиброза и кальцифи-кацией некротических участков.

Циглер (1905) наблюдал в ряде случаев утолщение интимы, иногда -- значительное. Могут возникать аневризматиче-ские расширения аорты. Участки склероза и кальцификации становятся заметны макроскопически уже после 16--20 инъекций. Значительные склеротические изменения развиваются также в почечных (Эрб), подвздошных, сонных (Циглер) артериях и во виутриорганных разветвлениях крупных артериальных стволов (Б.Д. Ивановский). Б.Д. Ивановский показал, что под влиянием многократных инъекций адреналина возникают существенные изменения и в мелких артериях и даже и капиллярах. Стенка последних утолщается, склерозируется и капилляры уже не прилежат, как в норме, непосредственo к паренхиматозным элементам органов, а отделены от них тонкой соединительнотканной прослойкой.

Уолтере (1950), изучая изменения сосудов при внутривенном введении собакам адреналина в больших дозах (8 мл раствора 1: 1000 каждые 3 дня), показал, что уже в пределах Норных 10 дней и даже ранее наблюдаются множественные кровоизлияния в средней оболочке грудной аорты, а также в мелких артериях сердца, желудка, желчного пузыря, почек, толстой кишки. Имеет место фибриноидный некроз средней оболочки и выраженный папартериит с периваскулярной клеточной реакцией. Предварительное введение животным диабсиамина предупреждает развитие этих изменений.

Девис и Устер (1952) показали, что при сочетании внутривенных инъекций кроликам э п и и е ф р и и а (по 25 мг на 1 кг веса) и тироксина (подкожное введение ежедневно по 0,15 мг на 1 кг веса) склеротические изменения в аорте бывают выражены особенно резко. При ежедневных подкожных инъекциях животным 500 мг аскорбиновой кислоты развитие артериосклероза заметно задерживается. Предварительное удаление щитовидной железы тормозит развитие артериосклероза, вызываемого эпинефрином (адреналином). Дистрофические изменения средней оболочки аорты и крупных сосудов с обызвествлением и образованием кист наблюдал Хьюпер (1944) у собак, переживших г и с т а м и н о в ы й що к. Гистамин вводился подкожно в смеси с пчелиным воском и минеральным маслом из расчета 15 мг на 1 кг веса животного (см. получение язвы желудка с. помощью гистамина).

Ранее Хыопер и Лэпдсберг (1940) показали, что при отравлении собак эр ит рол тетра нитрат О"м (введение через рот в течение 32 недель ежедневно, в, возрастающих дозах от 0,00035 г до 0,064 г) или азот н о кис л ы м н а т р и е м (введение через рот в течение нескольких недель по 0,4 г ежедневно) возникают выраженные дистрофические изменения, главным образом в средней оболочке легочной артерии и ее ветвях. Значительные отложения извести в отдельных случаях приводят к резкому сужению просвета сосуда. Хьюпер (1944) наблюдал развитие некрозов средней оболочки аорты с последующим обызвествлением и образованием кист у собак, которым 5 раз в неделю вводился в вену раствор метилцелл голозы в возрастающих количествах (от 40 до 130 мл). Опыт продолжался в течение шести месяцев.

Изменения аорты, аналогичные описанным выше, могут быть получены у животных при повторных инъекциях н и к о т и н а. А. 3. Коздоба (1929) вводил в вену уха кроликам ежедневно в течение 76--250 дней по 1--2 мл раствора никотина (средняя дневная доза -- 0,02--1,5 мг). Наблюдалась гипертрофия сердца и дистрофические изменения артерии, сопровождающиеся аневризматическим расширением. У всех животных имело место значительное увеличение надпочечников. Э. А. Жебровский (1908) обнаружил некрозы средней оболочки аорты с последующей кальцификацией и склерозом у кроликов, которых он помещал ежедневно по 6--8 часов под колпак, заполненный табачным дымом. Опыты продолжались в течение 2--6 месяцев. К. К. Маслова (1956) отметила дистрофические изменения в стенке аорты после ежедневных внутривенных инъекций кроликам 0,2 мл 1 % раствора никотина в течение 115 дней. Бейли (1917) получил выраженные дистрофические изменения средней оболочки аорты и крупных артерий с некрозами и множественными аневризмами при ежедневных внутривенных введениях кроликам 0,02--0,03 мл д и фт е р и й н о г о токсина в течение 26 дней.

Дафф, Гамильтон и Мзгпер (1939) наблюдали развитие некротического артериита у кроликов под влиянием многократных инъекций тир амина (внутривенное введение 50-- 100 мг препарата в виде 1% раствора). Опыт продолжался в течение 106 дней. У большинства кроликов имели место выраженные изменения аорты, крупных артерий и артериол почек, сердца и головного мозга, причем в каждом отдельном случае обычно поражались сосуды не всех трех органов, а какого-либо одного. В аорте имели место некрозы средней оболочки, нередко весьма значительные; аналогичные изменения обнаруживались в крупных сосудах почек. В сердце, почках и головном мозгу наблюдался артериолоиекроз с последующим гиалн-иозом сосудистой степки. У некоторых кроликов в связи с артериолоиекрозом развилось массивное кровоизлияние в головном мозгу.

АОРТИТЫ, ПОЛУЧАЕМЫЕ ПУТЕМ МЕХАНИЧЕСКОГО ТЕРМИЧЕСКОГО И ИНФЕКЦИОННОГО ПОРАЖЕНИЯ СОСУДИСТОЙ СТЕНКИ

В целях изучения закономерностей течение воспалительных и репаративиых процессов в стенке аорты некоторые исследователи используют механическое повреждение сосуда. Прпор и Хартман (1956) после вскрытия брюшной полости отсепаро-вывают аорту и повреждают стеику путем прокола ее толстой иглой с острым, загнутым концом. Болдвин, Тейлор и Хесс (1950) повреждают стенку аорты путем кратковременного воздействия низкой температурой. Для этого аорта обнажается в брюшном отделе и к стенке прикладывается узкая трубка, в которую впускается углекислота. Стенка аорты замораживается в течение 10--60 секунд. В конце второй недели после замораживания, в связи с некрозом средней оболочки, развивается аневризма аорты. В половине случаев имеет место кальцификация поврежденных участков. Нередко происходит метаплаетическое образование кости и хряща. Последний появляется не ранее четвертой недели после повреждения, а кость -- чеpез 8 недель. А. Соловьев (1929) прижигал стенку аорты и Сонных артерий раскаленным термокаутером. Шлихтер (1946) Дли получения у собак некрозов аорты обжигал стенку ее с помощью горелки. Выраженные изменения внутренней оболочки (кровоизлияния, некрозы) в отдельных случаях обусловли разрыв сосуда. Если этого не происходило, развивался склероз стенки с обызвествлением и образованием мелких полостей. Н. Андриевич (1901) травмировал стенку артерий, прижигая ее раствором азотнокислого серебра; в ряде случаев после этого пораженный отрезок обертывался целлоидином, Который, раздражая стенку сосуда, делал повреждение более значительным.

Тальке (1902) получал гнойное воспаление стенки сосуда путем введения в окружающую клетчатку культуры стафилококка. Ранее Крок (1894) показал, что гнойный артериит возникает при внутривенном введении животным культуры микроорганизмов лишь в том случае, если предварительно производится повреждение стенки сосуда. Ф.М. Халецкая (1937) изучила динамику развития инфекционного аортита, развивающегося вследствие перехода воспалительного процесса с плевры па стенку аорты. Кроликам между 6 и 7 ребрами в плевральную полость вводилась фистульная трубка. Отверстие оставалось открытым в течение 3--5 дней, а в отдельных опытах в продолжении трех месяцев. Через 3--5 дней развивался фибрипозно-гнойный плеврит и эмпиема плевры. Часто наблюдался переход процесса на стенку аорты. В последней вначале возникали некрозы средней оболочки; они развивались раньше, чем воспалительный процесс распространялся на аорту, и, но мнению Ф.М. Халецкой, обусловливались вазомоторными расстройствами на почве интоксикации (первичая дистрофия и некрозы средней оболочки). Если нагноение распространялось па аорту, в воспалительный процесс последовательно вовлекались наружная, средняя и внутренняя оболочки с развитием вторичных некротических изменений.

Таким образом, процесс заканчивался склерозом сосудистой стенки с образованием мелких и крупных рубцов. Во внутренней оболочке наблюдался тромбоартериит, заканчивающийся утолщением и склерозом интимы.

Литература:

Аничков H.H. Beitr. pathol. Anat. u. allg. Pathol.. Bel 56, 1913.

Аничков II.II. Verh. d. deutsch, pathol. Ges., 20:149, 1925.

Аничков II.H. Вести, хпр. и потрап, обл., т. 16--17 кн 48--49 стр. 105, 1929.

Аничков II.П. Экспериментальные исследования по атеросклерозу. В кн.: Л. И. Абрикосов. Частная патолог, анатомия т 2 стр. 378, 1947.

Вальдес А.О. Арх. патолог., 5, 1951.

Валькер Ф.И. Экспериментальные данные о флебите, тромбозе и эмболии. Сб. трудов, пос.вящ. 40-летию деятельности В. Н. Шевкуненко, Л., 1937.

Вартапeтов Б.Л. Врач. дело, 1. 4 3. 1941.

Вартапетов Б.Л. Врач. дело. 11 -- 12. 848, 1946.

Виноградов С.А. Арх. патолог., 2, 1950.

Виноградов С.А. Арх. патолог., 1, 1955.

Виноградов С.А. Бюлл. эксп. бпол. и мед., 5, 1956.

Вишневская О.II. Всес. конф. патологоанат. Тезисы докл., Л. 1954.

Подобные документы

Причины атеросклеротической, сифилитической, расслаивающейся, травматической и артериальной ложной аневризмы. Расширение участка сосуда вследствие врожденного или приобретенного дефекта в строении сосудистой стенки. Морфология аневризмы грудной аорты.

презентация , добавлен 19.11.2014


Причины возникновения дефекта (разрыва) внутренней оболочки стенки аорты с последующим поступлением крови в дегенеративно измененный средний слой. Патогенез расслоений аорты, ее симптоматика. Консервативное лечение аневризмы аорты брюшной полости.

презентация , добавлен 09.11.2016


Острая расслаивающая аневризма аорты - катастрофическое поражение, некроз среднего слоя стенки аорты вследствие атеросклероза. Аневризмы грудной аорты, рентгенологического исследования грудной клетки. Растущие и перфоративные аневризмы брюшной полости.

реферат , добавлен 23.04.2009


Расслаивающая, атеросклеротическая и сифилитическая аневризмы аорты. Артериовенозный врожденный порок. Заболевания соединительной ткани. Последствия разрыва аневризм сосудов головного мозга, сердца. Симптомы заболевания, диагностика и методы лечения.

презентация , добавлен 13.09.2015


Травматические аневризмы брюшной аорты. Классификация аневризм брюшной аорты. Ряд синдромов косвенно указывают на аневризму брюшной аорты. Этапы протекания прорыва аневризмы в забрюшинное пространство. Характеристика факторов в течении заболевания.

реферат , добавлен 04.07.2010


Жалобы больного на момент курации. Перенесенные заболевания и эпидемиологический анамнез. Исследование магистральных сосудов и артериального пульса. Диагноз и его обоснование. Лечение атеросклероза аорты и стеноза правой общей подвздошной артерии.

история болезни , добавлен 25.02.2009


Воспаление аорты и отходящих от нее ветвей с развитием частичной или полной их облитерации. Распространенность артериита Такаясу среди мужчин и женщин. Патологическая анатомия и патогенез. Клиническая картина и диагностика синдрома дуги аорты.

презентация , добавлен 12.10.2011


Атеросклероз венечных артерий и аорты. Нестабильная стенокардия без подъема сегмента ST. Медикаментозная терапия и план лечения пациента. История жизни больного и настоящего заболевания. Исследование сосудов. Нервно-психическая сфера и органы чувств.

история болезни , добавлен 21.10.2014


Изучение жалоб и анамнеза жизни больного, обследование его систем и органов. Установление диагноза на основе результатов лабораторно-инструментальных методов исследования. Клиническая картина ишемической болезни сердца (ИБС) и атеросклероза, план лечения.

история болезни , добавлен 05.02.2013


Открытый артериальный (боталлов) проток, его значение. Коарктация аорты основная причина всех врожденных пороков сердца. Аномалии длины, размера или непрерывности аорты. Аортопульмональное окно, его причины и последствия. Аномальный дренаж легочных вен.

Рассмотрим особо проблему моделирования атеросклероза. Экспериментальная модель последнего показательна во многих отношениях.

Кролику, травоядному животному, вводится в желудочно-кишечный тракт в течение длительного периода огромное количество холестерина, т. е. фактически чуждого для него продукта питания. Но ведь на протяжении всей истории человечества продукты, содержащие холестерин, были нормальными ингредиентами питания. Огромное значение холестерина для многообразных функций организма отражается также в способности последнего синтезировать холестерин независимо от диеты, местом синтеза является, в частности, артериальная система, т. е. стенки артерий.

Чуждый для кролика продукт питания — холестерин — наводняет кровь и как инородное химическое тело, не имеющее в организме кролика адекватных ферментных систем, расщепляющих холестерин, или органов, способных выделить холестерин во внешнюю среду, в изобилии откладывается в ретикулоэндотелиальной системе и в артериальной системе, проходя ее эндотелиальный барьер. Такова общая судьба крупномолекулярных соединений (типа метилцеллюлозы, пектина, поливинилового алкоголя), не расщепляемых средствами организма и не выделяемых им.

Следовательно, с общетеоретических позиций, определяющих сущность всякой модели, получаемый у кроликов феномен имеет лишь внешнее сходство с артериосклерозом человека. Это сходство морфологическое, химическое, но не этиологическое (экологическое) и не патогенетическое.

Кроличья модель атеросклероза является, прежде всего, результатом неадекватного питания. Она не может, поэтому рассматриваться как модель человеческого атеросклероза и как модель обменных нарушений холестеринового обмена, хотя бы потому, что отложения чужеродных веществ не могут быть документацией нарушения обмена тех же веществ, так же как, например, отложения свинца в костях не документируют нарушений свинцового обмена.

И последнее: при атеросклерозе человека вопрос о нарушении холестеринового обмена решается скорее отрицательно.

Сказанное не исключает большого познавательного значения той же модели.

Последняя учит, что сосудистые барьеры — очень условное понятие и что через них могут свободно проходить крупномолекулярные соединения даже вне специальных дизорий, т. е. таких форм проницаемости сосудистых стенок, какие имеют место при отеках, воспалении. Модель подчеркивает также значение артериальной системы в улавливании всех циркулирующих химических соединений, вообще чуждых для организма или ставших таковыми в процессе, например, денатурации белковых тел (амилоидоз, гиалиноз).

Методологически важная сторона той же модели заключается еще в том, что в ней вскрывается опасность односторонних суждений, в данном случае основанных на чисто морфологической документации.

«Проблема причинности в медицине», И.В.Давыдовский

История экспериментального моделирования болезней поучительна во многих отношениях и прежде всего для решения принципиальных вопросов, связанных с этиологией. Она поучительна также и в плане общей методологии биологического эксперимента, его теоретических основ и практических выводов из него. Необходимо отдавать отчет в том, что всякая модель является известным упрощением, лишь более или менее наглядной копией оригинала, какой-то…

Всякий опыт является «насильственным испытанием природы» (И. Мюллер, Muller), ее законов. Сама «природа не нарушает своих законов» (Леонардо Да Винчи). Однако всякий опыт, всякое моделирование (инфекции, рака, гипертонии и т. д.) неизбежно сопряжено с каким-то нарушением законов и нередко с искажением последних, поскольку закон еще не известен экспериментатору и в основе соответствующих поисков лежат подчас…

Абсолютно решающего эксперимента, по-видимому, не существует, особенно в биологии, где так много неизвестных величин, затрудняющих постановку надежно контролируемого эксперимента. Если речь идет о теории, то эксперимент «не может полностью и окончательно подтвердить» ее потому, что «один и тот же результат может следовать из разных теорий». С наибольшей и все же с неабсолютной точностью эксперимент может…

Эксперимент должен отталкиваться от практики наблюдения и от тех теоретических построений которые эта практика порождает. Другими словами, сначала наблюдение, потом обобщающие мысли и идеи, из наблюдений вытекающие, и, наконец, моделирование. Следовательно, «необходимость эксперимента» вытекает из практического опыта, когда возникают и идеи и вопросы, как исходная точка для опыта (С. П. Боткин). Экспериментальный метод сам по…

Искусственное введение пневмококков кролику и получение у него пневмонии формально говорит о пневмококке как о причине инфекции. Однако хорошо известно, что пневмония обычно возникает спонтанно, т. е. аутоинфекционно, без какого-либо экзогенного заражения. Очевидно, что и сделанное заключение о пневмококке как причине или «главной причине» пневмонии годится только для указанной постановки опыта, т. е. для данной…